双价杀虫蛋白基因在荧光假单胞菌中的表达及增效

摘要

利用广宿主质粒载体pJMSα-lac将苏云金芽胞杆菌(Bacillusthuringiensis)杀虫晶体蛋白基因cry1Ac和cry2Aa基因分别及一起进行克隆,将重组质粒导入能在多种作物上定殖、对植物病菌有良好抑菌和防治作用的荧光假单胞菌(Pseudomonasfluorescens)P303菌株,分别得到工程菌株IPP101、IPP201和IPP202.PCR-RFLP和Southernblot检测均证明目的基因已经导入了工程菌.SDSPAGE电泳显示工程菌中存在明显的Cry1Ac蛋白带;透射电镜观察发现含cry1Ac基因的两个菌株IPP101和IPP202中杀虫蛋白形成了典型的菱形晶体和蛋白包含体,而在野生P303菌株中均无这些结构.这些结果说明,工程菌中cry1Ac基因得到了很好表达.室内杀虫试验表明:工程菌对棉铃虫初孵幼虫的致死中浓度(LC50),只含cry1Ac的IPP101为0.00812mL/g饲料,只含cry2Aa的IPP201为0.02604mL/g饲料,含双基因的IPP202为0.00186mL/g饲料;HD73为0.00170mL/g饲料.cry1Ac和cry2Aa双基因表达产物具有显著增效作用,共毒系数达332.8.