口蹄疫病毒O型中和抗体检测固相阻断ELISA方法的建立

摘要

【目的】为评价O型口蹄疫病毒（foot-and-mouth disease virus,FMDV）灭活疫苗免疫后中和抗体（neutralizing antibodies,NA）水平，建立检测中和抗体的固相阻断ELISA （neutralizing antibodies solid-phase blocking ELISA,NA-SPBE）方法。【方法】本研究以本实验室前期制备的FMDV广谱反应性牛源单克隆抗体E32作为捕获抗体，以生物素标记的FMDV O型型内广谱中和牛源单克隆抗体C4作为检测抗体，经过条件优化建立了检测FMDV O型中和抗体的固相阻断ELISA方法，并对该方法进行了敏感性、特异性、重复性、交叉反应性与病毒中和试验（virus neutralization test,VNT）相关性等试验。【结果】抗体E32最佳包被浓度为0.5μg/mL,O型FMDV灭活抗原最佳稀释浓度为0.25μg/mL，生物素标记抗体C4-Bio最佳工作浓度为0.06μg/mL，链霉亲和素-HRP的最佳稀释度为1:40 000。以1.35 log10作为效价判定临界值时，敏感性和特异性分别为97.14%和98.84%。利用该方法分别检测FMDV A型、FMDV Asia1型、BVDV、PRRSV、CSFV、PPRV抗体阳性血清时，均为阴性，未出现交叉反应。该方法批内和批间重复试验的变异系数均＜10%，表明其重复性较好。利用该方法与VNT分别对160份血清样品进行检测，二者的相关系数r为0.807 5,P＜0.000 1，相关性显著。【结论】该方法可以检测FMDV O型中和抗体，为FMDV O型灭活疫苗免疫效果评价提供有力技术支撑。