调控Tim-3通路在免疫性肝损伤大鼠中对Th17细胞的影响

摘要

目的 建立免疫性肝损伤模型,探讨Tim-3通路在阻断或激活时对Th17细胞的影响.方法 大鼠尾静脉注射刀豆蛋白A (ConA)8周,建立免疫性肝损伤模型.无菌取脾脏制备脾淋巴细胞,取外周血分离血清后于-20℃保存,取肝脏组织放入4％的多聚甲醛中固定备用.在96孔板上将脾淋巴细胞平均分成5组,即阻断实验组、阻断对照组、激活实验组、激活对照组和ConA对照组.用Tim-3的单克隆抗体即Anti-Tim-3来阻断Tim-3通路;用Tim-3的重组配体galectin-9来激活Tim-3通路,37℃、5％ CO2培养箱中培养72 h,收集细胞上清液于-20℃保存.生化分析法测血清中ALT、AST和ALB的表达;HE染色观察肝脏组织的病理变化;免疫组化法测肝脏组织中IL-17A和ROR-γt蛋白的表达;ELISA法测细胞上清液中IL-17A及IL-6的表达;实时定量PCR测各组脾淋巴细胞ROR-γt mRNA的表达.结果 与对照组相比,模型组HE染色可见明显的炎性细胞浸润、肝脏组织损伤及较多的假小叶,免疫组化可见IL-17A和ROR-γt蛋白的表达明显升高;与阻断对照组相比,阻断实验组中IL-17A和IL-6的水平升高(P＜0.05);与激活对照组相比,激活实验组中IL-17A和IL-6的水平降低(P＜0.05);实时定量PCR显示与阻断对照组相比,阻断实验组中ROR-γt mRNA的表达明显增加(P＜0.05).结论 免疫性肝损伤的发病与Th17细胞密切相关,免疫调控Tim-3通路可通过影响Th17细胞效应,进而参与免疫性肝损伤的发病机制.