长距离PCR法扩增RHDV全基因组及其序列分析

摘要

从人工感染RHDV致死的兔肝组织中提取病毒总RNA,应用特异性引物将病毒RNA反转录成cD-NA,以此为模板用长距离PCR法扩增RHDV全基因组,将成功扩增出的RHDV全基因组克隆到pMD18-T载体中,经PCR鉴定及酶切分析后进行序列测定.测序结果表明,JX97全基因组由7 437个核苷酸组成,包括由9个核苷酸组成5'NCR、59个核苷酸组成3'NCR和一个至少含有27个核苷酸的poly(A)尾.序列比较结果显示,RHDVJX97株的衣壳蛋白与已报道的参考毒株具有较高的序列同源性,均在90%以上,提示所有的RHDV分离株具有较近的亲缘关系.