入免疫缺陷病毒1型蛋白酶抑制剂的微生物筛选模型的建立

摘要

目的采用基因工程方法,建立人免疫缺陷病毒1型蛋白酶(HIV-1 PR)的微生物检测法.用以筛选抗HIV PR抑制剂.方法合成编码HIV-1 PR识别序列24 bp低聚核苷酸片段,并将其插入质粒pBR322四环素耐药基因tetr,经亚克隆构建含突变之四环素耐药基因mtett的pACYC184M.以后者转染含HIV-1 PR表达载体(pPOLO)的大肠杆菌,构建能同时表达四环素耐药蛋白及HIV-1 PR之工程菌(TLV331).结果在选择培养基内,TLV331生长受HIV-1 PR控制,HIV-1 PR表达时可破坏TLV331四环素抗性;HIV-1 PR活性受到抑制时,其四环素抗性则恢复.此特性经HIV-1 PR的已知抑制剂验证并以该法对31个化学合成样品进行筛选.结论通过基因工程方法建立了HIV-1 PR的微生物检测法,该法可作为抗HIV PR抑制剂之初筛模型.