DR4死亡结构域结合蛋白的初步研究

摘要

目的克隆DR4死亡结构域的结合蛋白,为进一步研究DR4诱导细胞凋亡的信号传递途径提供条件.方法以TRAIL(TNF-related apoptosis inducing ligand)死亡受体DR4的死亡结构域(DR4DD)为钓饵,采用酵母双杂交系统筛选人白细胞MATCHMAKER cDNA文库.以DNA自动分析仪测定核苷酸序列,采用计算机软件分析核苷酸的同源性及功能结构域.并用免疫共沉淀方法分析人类甲酰肽受体1(formyl peptide receptor-like 1,FPRL1)在哺乳动物细胞内是否与DR4CD(the cytoplsmic domain of DR4)特异性地结合.结果获得了两个阳性克隆pADB1和pADB2.DNA序列分析及同源性比较表明,pADB1的插入片段与人FPRL1的mRNA序列具有97%的同源性.pADB2的插入片段与GeneBank中的已知序列无同源性.免疫共沉淀结果表明FPRL1在哺乳动物细胞内可与DR4CD特异性地结合.结论FPRL1可与DR4的死亡结构域特异性结合,推测FPRL1与DR4的结合可能在DR4介导的细胞凋亡信号传导途径中发挥一定的作用.