酶联免疫吸附试验检测人叶酸受体抗体IgM方法的建立及评价

摘要

目的 建立酶联免疫吸附试验(ELISA)检测人血浆叶酸受体抗体IgM的方法.方法 将从正常分娩健康产妇的胎盘中提取、纯化人叶酸受体蛋白稀释至5 ng/μl,作为抗原包被96孔板,以羊抗人IgM作为二抗,以健康人混合血浆作为标准品,浓度设定为1.采用ELISA检测人血浆叶酸受体抗体IgM水平,并评价该方法的灵敏度、精密度和稳定性.分别以人叶酸受体蛋白和牛源叶酸结合蛋白作为包被蛋白,检测24例健康新生儿母亲和20例神经管畸形患儿母亲的血浆标本叶酸受体抗体IgM水平,比较两种包被蛋白的检测结果.结果 ELISA方法可以检测的人血浆叶酸受体抗体IgM浓度为6.25×10-4～8.00×10-2,最低检测限为3.12×10-4.该方法检测高、中和低浓度血浆叶酸受体自身抗体IgM的批内差异分别为6.61％、3.50％和5.12％,批间差异分别为4.54％、5.49％和5.44％,此方法检测不同稀释倍数样品中叶酸受体自身抗体IgM浓度的测定值均在均数±10%范围内.人叶酸受体包被检测板测得的健康新生儿母亲(t=-11.9,P＜0.001)及神经管畸形患儿母亲(t=7.35,P＜0.001)的叶酸受体抗体IgM浓度均显著高于牛源叶酸结合蛋白包被检测板的测定值.结论 本研究成功建立了检测人血浆叶酸受体抗体IgM的ELISA方法,该方法以人叶酸受体蛋白作为包被蛋白,检测灵敏度高,精密度好,结果稳定.