朱砂叶螨酯酶同工酶研究及酯酶cDNA克隆与序列分析

摘要

本文以分布广、食性杂、危害大的重要农业害螨——朱砂叶螨为研究对象，对其室内阿维菌素汰选品系进行抗性测定和酯酶同工酶研究，结果表明酯酶活性增强与朱砂叶螨对阿维菌素产生抗性有关。在此基础上，对朱砂叶螨酯酶基因进行了克隆和序列分析。 本研究以朱砂叶螨为材料，通过对抗阿维菌素品系酯酶同工酶的研究，并与不同动物的酯酶基因进行比对后，根据酯酶基因的保守序列设计引物，分别从朱砂叶螨相对敏感品系和阿维菌素抗性品系中克隆得到了其酯酶基因的3’末端，为今后进一步从分子水平研究阐明螨类的酯酶抗性本质奠定基础。

目录

缩写词

文献综述

1叶螨抗药性研究进展

2酯酶及其研究进展

2.1酯酶的分类

2.2磷酸酯酶

2.3乙酰胆碱酯酶

2.4羧酸酯酶

引言

第1章朱砂叶螨抗药性品系的选育

1.1材料与方法

1.1.1试虫饲养

1.1.2农药品种

1.1.3抗药性品系的选育方法

1.1.4生物测定

1.1.5数据处理

1.2结果与分析

1.2.1敏感基线

1.2.2朱砂叶螨抗阿维菌素品系(AbR)的选育

1.3小结与讨论

第2章朱砂叶螨抗阿维菌素品系酯酶同工酶研究

2.1材料与方法

2.1.1供试朱砂叶螨

2.1.2主要试剂及仪器

2.1.3测定方法

2.2结果与分析

2.3小结与讨论

第3章朱砂叶螨酯酶cDNA片段的克隆及序列分析

3.1材料与方法

3.1.1试验材料、载体和菌种

3.1.2.试剂和试剂盒

3.1.3主要仪器

3.1.4总RNA的提取

3.1.5引物设计

3.1.6 3'RACE原理和程序

3.1.7目的片段的克隆与测序

3.1.8测序与生物信息学分析

3.2结果与分析

3.2.1朱砂叶螨总RNA提取结果

3.2.2朱砂叶螨酯酶基因cDNA 3'末端的扩增与克隆

3.2.3朱砂叶螨酯酶基因的核苷酸序列及推导的氨基酸序列

3.2.4朱砂叶螨酯酶推导氨基酸序列同源性分析

3.2.5朱砂叶螨酯酶基因的同源性分析

3.2.6朱砂叶螨酯酶基因的聚类分析

3.3小结与讨论

第4章结论

4.1朱砂叶螨抗阿维菌素品系选育

4.2朱砂叶螨抗阿维菌素品系酯酶同工酶研究

4.3朱砂叶螨酯酶基因3'末端的克隆及序列分析

参考文献

附录硕士期间发表的文章及所研究序列在GenBank中的注册号

致谢