葛根丹参药对有效成分提取分离及其胶囊制剂的研究

摘要

本课题针对临床发病率高的冠心病心绞痛疾病,选择“北京四大名医”之一施今墨治疗冠心病心绞痛证属血脉瘀滞者的经验药对葛根与丹参为研究对象,根据其理化性质和临床需求,将其制备成口服胶囊的剂型。
　　 施今墨,中医临床家,教育家。毕生致力于中医事业的发展。提倡中西医结合,培养了许多中医人才。长期从事中医临床,治愈了许多疑难重症,创制了许多新成药,献出700个验方。为中医事业做出突出贡献,在国内外享有很高的声望。葛根丹参药对源于《施今墨药对》。其意在活血化瘀,祛瘀生新,用于冠心病心绞痛血脉瘀滞者。方中葛根轻扬升发、解肌退热、生津止渴、滋润筋脉,扩张脑、心血管,改善血液循环；丹参活血祛淤,化瘀生新、凉血消痈、镇静安神。二药合用,相互促进,活血化瘀。
　　 因此,本实验首先从葛根丹参复方合煎液的化学成分提取分离入手,从中得到9个单体化合物:丹参酮ⅡA、丹参酮Ⅰ、隐丹参酮、二氢丹参酮、刺芒炳花素、大豆苷元、葛根素、大豆苷、丹酚酸B,并通过UV、MS、1H—NMR、13C—NMR等分析方法进行结构鉴定。并建立了采用近红外光谱仪同时定量分析其中3种代表性成分的模型,肯定了近红外是简单、迅速、不破坏样品、能同时定量分析多种成分的一种新的方法。之后根据文献拟定葛根素、丹参酮、丹酚酸B的含量为整个实验的考察指标,建立了葛根丹参有效成分高效液相色谱含量测定方法,对葛根素、丹参酮、丹酚酸B3种化合物的含量进行跟踪测定。通过正交实验优化了葛根丹参复方合提的提取工艺,并对大孔吸附树脂纯化工艺进行了系统研究。接着本实验对葛根丹参胶囊的成型工艺进行了研究,并初步制定了质量标准草案。
　　 我们在对该药对的化学成分研究的基础上,将其开发为治疗冠心病心绞痛的国家中药六类新药一葛根丹参胶囊。本专题对主要分为四部分:一是葛根丹参药对中化学成分的研究；二是近红外对葛根丹参药对多种有效成分进行同时定量分析的探讨；三是葛根丹参有效成分质量控制研究；四是葛根丹参胶囊制剂的研究。
　　 1.葛根丹参合煎液的提取分离
　　 为了对葛根丹参药对进行质量控制和新药开发奠定物质基础,首先运用多种柱层析法对药对葛根丹参合煎液的化学成分进行了进一步的系统分离研究。从合煎液中共分离获得了10个化合物,用波谱学方法(UV、NMR、MS),辅以理化常数、对照品,鉴定了其中9个单体化合物:丹参酮ⅡA(tanshinoneⅡA)、丹参酮Ⅰ(TanshinoneI)、隐丹参酮(Cryptotanshinone)、二氢丹参酮Ⅰ(DihydrotanshinoneⅠ)、刺芒柄花素(Formononetin)、大豆苷元(Daidzein)、葛根素(Puerarin)、大豆苷(Daidzin)、丹酚酸B(Tanshinol B)。接下来我们根据文献用葛根素、丹参酮ⅡA和丹参酸B三种成分对葛根丹参药对进行质量控制,为全面控制其脂溶性成分和水溶性成份作了基础研究。
　　 2.近红外同时定量葛根丹参有效成分分析的探讨
　　 近红外光谱技术是近年来发展迅速的一种绿色分析技术,已经在农业、食品、石化等领域中得到了成功的应用,以其快速方便、适应在线分析和无损分析的特点,在药物分析中已经得到了重视和应用,各种不同用途的分析仪器和计算机软件都不断地设计出来。
　　 针对中药复方化学成份的复杂性,选择典型药对葛根丹参,就近红外光谱技术在中药复方提取物质量控制和过程分析中的应用进行初步的探讨。以其对应的近红外光谱为标准数据集,采用近红外光谱技术偏最小二乘回归法建立定量校正模型分析有效成分的含量。研究证明近红外技术与传统的分析方法相比,具有方便、快速、无损的特点,能够同时定量分析中药复方制剂中多种有效成分。
　　 3.葛根丹参有效成分质量控制研究
　　 以有效成分葛根素、丹参酮ⅡA及丹酚酸B为考察指标,通过正交试验优化了葛根丹参的提取方法为:葛根丹参粉末混合后采用75％乙醇回流提取3次每次1h；通过实验考察提取液浓缩至0.2g生药/ml时,丹参酮ⅡA97.3％都转移至沉淀中,再经过离心把提取液分为两部分,脂溶性成分经水洗至Molishi反应为阴性,水溶性成分经优选过的大孔树脂D101-A纯化,精制后的两部分再过400目筛混合均匀。经HPLC方法测定,暂定葛根丹参纯化后浸膏粉葛根素、丹参酮ⅡA及丹酚酸B的含量分别不低于10％、1％及11％。
　　 4.葛根丹参胶囊制剂的研究
　　 根据葛根丹参浸膏粉的理化性质,将其制成胶囊剂型,并对葛根丹参胶囊进行了质量控制。采用TLC法鉴别了制剂中的葛根和丹参,结果表明薄层色谱斑点清晰,特征性强,重现性好,隐性无干扰,适用于葛根丹参胶囊的定性鉴别。
　　 采用HPLC法测定了制剂中葛根素、丹参酮ⅡA和丹酚酸B三种成分。实验结果表明,液相色谱的线性、精密度、重现性、加样回收率均良好,并制定了其含量限度。规定本品每粒胶囊含葛根以葛根素计,不得少于35mg；含丹参以丹参酮ⅡA和丹酚酸B计,分别不得少于6mg,40mg。
　　 本课题采用常温试验和加速试验分别对制剂的定性鉴别、含量测定、性状外观、装量差异、水分测定、崩解时限项进行了3个月的考察,结果均无明显变化,表明本品在考察其内稳定,稳定性良好。
　　 研究结果表明:葛根丹参胶囊制备工艺合理,质量稳定性良好。为后期的工业生产提供了研究基础。

目录

文摘

英文文摘

注译表

文献综述

1.冠心病心绞痛概述

2.葛根丹参药对组方特点、立题依据

3.葛根丹参单味药研究概况

实验部分

第一章 葛根丹参药对合提液中化学成分提取分离及鉴定

1 前言

2 材料与方法

第二章 采用近红外对葛根丹参药对提取物进行定量的探讨

1 引言

2 材料与方法

第三章 葛根丹参有效成分质量控制研究

第一节 葛根丹参有效成分含量测定方法的建立

第二节 葛根丹参有效部位提取工艺研究

第三节 葛根丹参有效部位质量标准研究

第四章 葛根丹参有效部位胶囊制剂的研究

引言

第一节 葛根丹参胶囊剂型处方工艺的研究

第二节 质量标准研究

第三节 稳定性实验

第五章 结论

参考文献

致谢

附图