益气活血中药促血管生成的信号转导机制研究及相关文献评价

摘要

治疗性血管新生已经成为缺血性疾病研究领域的热点，益气活血中药治疗冠心病的历史悠久，疗效显著，其促进血管新生，改善心肌供血，已经通过临床和实验研究得到证实，因此益气活血中药促血管新生可能是其治疗冠心病的重要机制之一。本研究通过探讨益气活血中药促大鼠缺血心肌血管新生的分子机制，揭示其干预血管生成的作用和分子靶标，为其防治缺血性疾病提供实验依据。
　　 本论文分为三部分：基础研究、临床文献系统评价和文献综述。
　　 一、基础研究包括以下三部分：
　　 实验一：益气活血中药对大鼠缺血心肌的促血管生成作用
　　 目的：观察益气活血中药人参三七组方促进大鼠缺血心肌血管新生的作用。
　　 方法：100只Wistar大鼠随机分为空白组、假手术组、模型组、倍他乐克组和大、小剂量人参三七组方组。采用冠状动脉结扎法建立大鼠急性心梗模型，并于造模后予相应药物治疗12 d。观察各组心肌细胞形态学改变，检测血清血管内皮细胞生长因子(VEGF)的表达；采用Ⅷ因子及CD105抗体检测微血管密度。结果：人参三七组方能够减轻心肌细胞变性，减少炎症细胞，增加微血管密度，提高血清VEGF的浓度。结论：人参三七组方能够保护缺血心肌细胞，具有良好促进急性心梗后大鼠缺血心肌的微血管新生，增加缺血心肌微血管密度的作用。
　　 实验二：益气活血中药对大鼠缺血心肌VEGFR—2和HIF—1α表达的影响
　　 目的：探讨益气活血中药人参三七组方对AMI大鼠缺血心肌VEGFR—2和HIF—1α表达的影响。方法：造模及处理方法同实验一，给药结束后，蛋白免疫印迹法检测缺血心肌的VEGFR—2和HIF—1α的蛋白表达，实时聚合酶链式反应法检测缺血心肌VEGFR—2、HIF—1αmRNA表达。结果：大、小剂量人参三七组方组及倍他乐克组VEGFR—2、HIF—1α蛋白和mRNA表达均显著高于模型组(P<0.05);大、小剂量组之间比较，差异亦有统计学意义。倍他乐克组VEGFR—2、HIF—1α蛋白和mRNA高于大、小剂量人参三七组方组(P<0.01)。结论：人参三七组方能够促进缺血心肌VEGFR—2、HIF—1α表达，从而改善心肌缺血，促进侧支循环的形成，具有一定剂量依赖性。
　　 实验三：益气活血中药对Ras下游信号转导通路的影响
　　 目的：观察益气活血中药人参三七组方对Ras信号通路的影响，探讨益气活血中药促进血管新生的信号转导途径。方法：造模及处理方法同实验一，给药结束后，蛋白免疫印迹法检测缺血心肌中Ras、c—Raf—1、ERK1/2及p—ERK1/2的蛋白表达，实时聚合酶链式反应法检测缺血心肌Ras、c—Raf—1、ERK1、ERK2 mRNA表达。结果：各组ERK1/2蛋白表达无显著性差异，大、小剂量人参三七组方组及倍他乐克组Ras、c—Raf—1、p—ERK1/2蛋白和Ras、c—Raf—1、ERK1/2mRNA表达均显著高于模型组(P<0.05)。结论：人参三七组方能够促进缺血心肌Ras信号通路上的Ras、c—Raf—1及ERK1/2表达，说明人参三七组方可能通过Ras信号通路来促进血管新生。
　　 二、临床文献系统评价：对1994年～2009年在科技期刊上公开发表的益气活血中成药治疗不稳定心绞痛的临床文献进行系统评价。
　　 目的：对益气活血中成药治疗不稳定心绞痛临床研究进行系统评价。方法：①以中文标题：不稳定性心绞痛and(全部检索条目：中医or中药or中西医结合)and(全部检索条目：益气or活血)的检索式检索中国生物医学文献光盘数据库，年限为1994年1月至2009年12月。②由2位研究者按照文献纳入、排除标准独立进行文献筛选，意见不同者通过讨论解决。⑧获取文献的相关研究特征资料，并加以评价。④对合格的随机对照试验，进行定量的Meta分析。结果：①共检索到170个文献。②经两次筛选，剔除不符合要求以及重复报道的文献，最终共有17篇文献入选评价。③对17篇文献进行Meta分析，总病例数1644例。④益气活血中成药包括愈心痛胶囊、通心络胶囊、复方丹参滴丸(片)、舒心益脉胶囊、步长稳心颗粒、活血通脉胶囊、血府逐瘀胶囊。Meta分析显示，加用益气活血中成药干预对不稳定心绞痛患者心绞痛症状和心电图的改善较单纯西医基础治疗明显提高，能减少硝酸甘油的用量，显著降低血浆内皮素(ET)、血浆内α—颗粒膜蛋白(GMP—140)等与动脉粥样硬化斑块稳定相关指标。结论：益气活血中成药干预不稳定心绞痛在改善心绞痛的症状、心电图表现，减少硝酸甘油的用量以及降低ET、GMP—140方面有一定的疗效。但由于纳入研究的质量不高，还有待进一步研究。
　　 三、文献综述部分通过对123篇文献的梳理和总结，探讨和综述了VEGF、CD105与血管新生的关系及其研究进展，并对益气活血法促冠心病血管新生的研究文献进行了初步总结，提出今后应临床研究与体内外实验研究相结合，从多途径、多环节探讨中药促进冠心病缺血心肌血管新生的作用及信号转导机制。
　　 本研究以Ras蛋白信号通路为主线，观察人参、三七组方对血管生成过程中Ras信号转导系统的干预作用及其机制，属于中医药防治冠心病研究领域的原创性研究工作；借鉴CD105检测肿瘤微血管密度的方法，采用CD105检测缺血心肌的微血管密度，是检测指标的创新应用。

目录

文摘

英文文摘

英文缩略词表

前言

第一部分 基础研究

第一章 益气活血中药对大鼠缺血心肌的促血管生成作用

1 材料和方法

2 结 果

3 讨论

参考文献

第二章 益气活血中药对大鼠缺血心肌VEGFR-2和HIF-1α表达的影响

1 材料和方法

2 结果

3 讨论

参考文献

第三章 益气活血中药对Ras下游信号转导通路的影响

1 材料和方法

2 结果

3 讨论

参考文献

第二部分 临床研究

1 研究方法

2 结果

3 讨论

4 问题与思考

参考文献

第三部分 文献综述

综述一 血管新生的调控以及益气活血药促进冠心病血管新生的研究

参考文献

综述二 VEGF促血管新生的研究进展

参考文献

综述三 CD105与血管新生

参考文献

小结

论文创新点

附件 Jadad评分表

致 谢

个人简历

附录