消银解毒饮治疗寻常型银屑病的细胞生物学研究

摘要

银屑病是一种以红斑、鳞屑为主要表现的慢性炎症性皮肤病，在我国和全世界都是常见病、多发病。当前银屑病的病因和发病机制尚未完全得以阐明，治疗仍然存在疗效不满意和易于复发的问题。现代研究表明，银屑病的基本病理表现为表皮角质形成细胞的过度增生和分化不全，以及真皮毛细血管的增生。我院内制剂——消银解毒饮在我科临床应用二十余年，取得了良好的疗效。我科近期完成国家中医药管理局重点科研课题临床研究显示，其治疗银屑病的总有效率为91.8％，显著优于复方青黛胶囊对照组；用药治疗4周后，患者鳞屑中IL-8含量较治疗前明显下降。在动物实验研究证实，其对SEB诱导的小鼠血清IL-8的升高有拮抗作用，具有显著的免疫调节功能。为探讨消银解毒饮除通过免疫调节而发挥其治疗作用外，是否尚具有对角质形成细胞的直接作用；对真皮血管内皮细胞有何影响；以及消银解毒饮中凉血、解毒、祛风除湿等三组主要成分在治疗银屑病时所起的作用。我们运用药理血清的研究方法，以角质形成细胞株COLO-16和人脐静脉内皮细胞株ECV-304为研究对象，用四唑盐(MTT)比色法观察消银解毒饮及拆方后各组药物血清对其增殖的影响；用流式细胞技术观察药物对其凋亡的影响；用双抗体夹心ABC-ELISA法测定药物对角质形成细胞分泌VEGF的影响。通过细胞生物学方面的研究，进一步探讨了消银解毒饮治疗银屑病的作用机制和作用靶位。并为中医辨证组方规律的研究以及银屑病的临床治疗提供新的思路和方法。 结果显示：①MTX组较蒸馏水组细胞存活率明显降低，随着浓度的升高差异亦加大，在浓度高于10％时二者有极其显著性差异(P<0.001)。消银解毒饮组和凉血方组体外培养角质形成细胞COLO-16的存活率明显降低，且细胞的存活率与含药血清浓度呈负相关，浓度越高存活率越低。消银解毒饮组在浓度为5％、10％时较蒸馏水组有显著性差异(P<0.05)，当浓度升高到20％时有极其显著性差异(P<0.001)。凉血方组在浓度为10％时较蒸馏水组有显著性差异(P<0.05)，当浓度升高到20％时有极其显著性差异(P<0．001)。而解毒方组和祛风除湿方组随着含药血清浓度的升高体外培养角质形成细胞COLO-16的存活率有所降低，但各个浓度组与蒸馏水相比无显著性差异(P>0.05)。②在含药血清浓度为20％时，解毒方组、祛风除湿方组、凉血方组等三组细胞的凋亡率与蒸馏水组比较无显著性差别(P<0.05)；而消银解毒饮组、MTX组凋亡率显著增高，与蒸馏水组相比有极为显著性差异(P<0.001)。③在5％浓度下，MTX组、消银解毒饮组和凉血方组体外培养血管内皮细胞的存活率均有所降低，但只有MTX组与对照组比较有较为显著的差别(P<0.05)。在10％浓度下，消银解毒饮组、凉血方组及MTX组血管内皮细胞的存活率均有所下降，其中消银解毒饮组和MTX组细胞存活率下降的较为明显，与对照组比较有极其显著性差异(P<0.001)，凉血方组与对照组比较亦有较为显著的差别(P<0.05)。在20％浓度下，消银解毒饮组、祛风除湿方组、凉血方组以及MTX组血管内皮细胞的存活率均有下降，其中消银解毒饮组、凉血方组及MTX组与对照组比较有极其显著性差异(P<0.001)。祛风除湿方组有较为显著差异(P<0.05)。④在5％浓度下，MTX组和消银解毒饮组对体外培养角质形成细胞COLO-16分泌VEGF有抑制作用，消银解毒饮组的抑制作用更为明显，与对照组相比有极其显著的差异。在10％浓度下，消银解毒饮组、解毒方组及MTX组对COLO-16细胞分泌VEGF均有抑制作用，其中消银解毒饮组和解毒方组与对照组比较有极其显著性差异(消银解毒饮组P<0.001，解毒方组P<0.01)。在20％浓度下，消银解毒饮组、解毒方组、凉血方组以及MTX组对COLO-16细胞分泌VEGF均有抑制作用，其中消银解毒饮组、解毒方组及MTX组与对照组比较有极其显著性差异(P<0.001)。消银解毒饮组、解毒方组凉血方组及MTX组随着含药血清浓度的升高VEGF含量降低，两者呈负相关。 结果表明：①消银解毒饮能抑制银屑病患者角质形成细胞的异常增殖并诱导其凋亡。②消银解毒饮对患者血管内皮细胞的过度增生亦具有的抑制作用。③消银解毒饮还可抑制患者角质形成细胞分泌血管内皮细胞生长因子。④在消银解毒饮的拆方中，凉血药物对抑制细胞的过度增殖发挥主要作用，解毒药物对抑制角质形成细胞分泌VEGF起主要作用；而三组药物的协同配合可使各种作用明显加强，从而对银屑病的有效治疗发挥更好的作用。⑤消银解毒饮除通过免疫调节而发挥其治疗作用外，还可通过对角质形成细胞过度增殖的直接抑制及诱导其凋亡，抑制真皮微血管的异常增生而发挥治疗作用。消银解毒饮可通过多个环节，多个靶点对银屑病发挥治疗作用。为临床运用消银解毒饮治疗银屑病提供了重要的理论依据。

目录

论文说明：英文缩略语词表

综述一中药治疗银屑病实验研究进展

综述二银屑病发病机制研究进展

综述三银屑病中医内治概况

前言

实验一消银解毒饮及拆方对角质形成细胞COLO-16增殖和凋亡的调控作用

材料与方法

实验结果

实验二消银解毒饮及拆方对人脐静脉内皮细胞株ECV-304增殖的影响

材料与方法

实验结果

实验三消银解毒饮及拆方对角质形成细胞COLO-16分泌VEGF的影响

材料与方法

实验结果

讨论

参考文献

致谢

个人简历