大鼠脑内注射Aβ致海马损伤的炎症相关机制及通络救脑口服液的作用

摘要

目的:观察通络救脑口服液对双侧海马注射Aβ<,1-40>建立的AD模型大鼠学习记忆能力的影响及其干预的分子机制，为该药临床应用提供科学的依据。 方法：鼠龄8-12周的SD雄性大鼠140随机分为通络救脑口服液低剂量组(12mgkg<'-1>d<'1>)、通络救脑口服液中剂量组(24 mgkg<'-1>d<'1>)、通络救脑口服液高剂量组(48mgkg<'-1>d<'1>)、模型组、盐酸多奈哌齐组、假手术组和空白对照组共七组。采用大鼠大脑海马立体定向注射β-淀粉样蛋白<,1-40>建立AD大鼠模型，复制AD模型后第三天通络救脑口服液组、盐酸多奈哌齐组给药干预共28天后检测各项指标。采用Moms水迷宫测试大鼠寻找平台所需时间和通过原平台次数以检测大鼠空间学习记忆能力的变化，取海马组织电镜观察超微结构的变化，采用免疫组织化学染色和计算机图像分析技术测定海马区AChE、ChAT、NF-kB、CRP、NOS和SS蛋白阳性目标积分光密度以检测其表达的变化，应用实时定量PCR法(SYBR Green Ⅰ嵌合荧光法)检测Bax、Bc1-2、APP、BACE1 mRNA表达的变化，采用双抗体夹心ABC-ELISA法检测血清TNFα和IL-1β含量的变化，采用免疫印迹法检测SYP和caspase-3蛋白含量的变化，采用分光光度法检测了SOD、MDA、MAO酶活性的变化，采用荧光分光光度法检测了脂褐素的含量变化，以及通络救脑口服液对上述指标的影响。 结论： 1、大鼠大脑海马立体定向注射β-淀粉样蛋白140建立的AD大鼠模型，较好的模拟了老年性痴呆的改变，可作为老年性痴呆的动物模型之一。2、通络救脑口服液对拟AD模型大鼠脑内海马组织超微病理改变具有改善作用。3、通络救脑口服液可显著改善拟AD模型大鼠的学习记忆障碍，这可能与它具有提高ChAT、NOSl、SS和synapsin蛋白表达，降低AChE蛋白表达有关。4、通络救脑口服液可抑制促凋亡基因Bax mRNA和caspase-3蛋白表达，促进抗凋亡基因Bc1-2 mRNA的表达，从而发挥抗神经细胞凋亡的作用。5、通络救脑口服液能增加拟AD大鼠SOD活性，降低MAO和MDA活性，从而具有抗氧化作用，这可能是其发挥抗AD作用的机理之一。6、通络救脑口服液可抑制APP和BACE1的过度表达，从而减少海马Aβ在脑内的沉积。7、通络救脑口服液能抑制血清TNFα和IL-1β的含量，降低大脑海马组织CRP和NK-kB的表达，因而具有抗炎作用，通过抗炎可能是其治疗AD机理之一。

目录

论文说明:英文名词缩略语

文献综述

1中医学对老年性痴呆的认识

1.1中医古代文献对老年性痴呆的认识

1.2中医学对老年性痴呆病位的认识

1.3中医学对老年性痴呆病因病机的认识

1.4中医药对老年性痴呆的临床治疗概况

2现代医学对老年性痴呆的认识

2.1流行病学研究

2.2危险因素的研究

2.3病理变化研究

2.4治疗研究

3参考文献

前言

实验一TLJN口服液对AD模型大鼠学习记忆能力的影响及其机制

1材料与方法

1.1材料、仪器与试剂

1.2实验方法

2结果

2.1 TLJN口服液对AD大鼠学习记忆能力的影响

2.2 TLJN口服液对AD模型大鼠海马区NOS1蛋白表达的影响

2.3 TLJN口服液对AD模型大鼠海马区SS蛋白表达的影响

2.4 TLJN口服液对AD模型大鼠海马区AChE蛋白表达的影响

2.5 TLJN口服液对AD模型大鼠海马区ChAT蛋白表达的影响

2.6 TLJN口服液对AD大鼠脑组织synapsin蛋白表达的影响

3讨论

4参考文献

实验二TLJN口服液对AD模型大鼠抗炎作用的影响

1材料与方法

1.1材料、仪器与试剂

1.2实验方法

2结果

2.1 TLJN口服液对AD大鼠血清TNF-α含量的影响

2.2 TLJN口服液对AD大鼠血清IL-1β含量的影响

2.3 TLJN口服液对AD模型大鼠海马区CRP表达的影响

2.4 TLJN口服液对AD模型大鼠海马区NF-κB表达的影响

3讨论

4参考文献

实验三TLJN口服液对AD模型大鼠抗氧化作用的影响

1.材料与方法

1.1材料、仪器与试剂

1.2实验方法

2结果

2.1大鼠海马注射Aβ1-40后SOD酶活性的变化及TLJN口服液的干预作用

2.2大鼠海马注射Aβ1-40后MDA酶活性的变化及TLJN口服液的干预作用

2.3大鼠海马注射Aβ1-40后MAO酶活性的变化及TLJN口服液的干预作用

2.4大鼠海马注射Aβ1-40后脑组织脂褐素含量的变化及TLJN口服液的干预作用

3讨论

4参考文献

实验四TLJN口服液对AD模型大鼠Aβ相关基因的影响

1材料与方法

1.1材料、仪器与试剂

1.2实验方法

1.3统计学方法

2结果

2.1大鼠海马注射Aβ1-40后APP mRNA表达的变化及TLJN口服液的干预作用

2.2大鼠海马注射A β1-40后BACE1 mRNA表达的变化及TLJN口服液的干预作用

3 讨论

4参考文献

实验五TLJN对AD模型大鼠凋亡相关蛋白和基因的影响

1材料与方法

1.1材料、仪器与试剂

1.2实验方法

2结果

2.1大鼠海马注射Aβ1-40后Bcl-2 mRNA表达的变化及TLJN口服液的干预作用

2.2大鼠海马注射Aβ1-40后BaxmRNA表达的变化及TLJN口服液的干预作用

2.3大鼠海马注射Aβ1-40后caspase-3蛋白表达的变化及TLJN口服液的干预作用

2.4 TLJN口服液对AD大鼠海马CA3区超微结构的影响

3讨论

4参考文献

小结

致谢

个人简历