应用生物素-链亲合素系统的人血清CA19-9抗原固相酶免疫分析方法的建立和初步应用

摘要

该文应用抗肿瘤相关抗原CA19-9的单克隆抗体C192,引入生物素-链亲合素系统,建 立了人血清CA19-9抗原的固相酶免分析法.以链亲合素包被聚苯乙烯微孔条,它能结合上生物素化的C192单抗,与辣根过氧化物酶标记的C192单抗一起,对血清中的CA19-9抗原形成夹心免疫复合物,对其进行定量测定.该文详细研究了生物素化抗体和酶标抗体的最佳工作浓度,反应的动力学性质,底物显色动力学性质,以及在4下保存的稳定性,对方法进行了 全面的鉴定并进行了初步的应用研究.实验采用两步法,第一步将生物素化抗体与血清中的CA19-9抗原结合到链亲合素包被的微孔板上,第二步加入辣根过氧化物酶标记的C192单抗,与结合到固相上的CA19-9抗原形成夹心免疫复合物,最后加入TMB底物显色.该方法灵敏度 为0.8u/ml,工作范围3.5-500u/ml,平均回收率101.7％,批内变异5.1％,批间变异9.1％.测定了84例正常人血清,CA19-9抗原浓度平均为12.32+489.2u/ml.如以30u/ml为阳性界值,则对胰腺癌检测的灵敏度为70.0％,特异性96.43％,说明该方法在胰腺癌诊断中有重要 价值.

目录

综述 酶免疫分析（EIA）中信号放大系统的应用

前 言

材 料

主要仪器

主要试剂

溶液

其它实验材料

血清标本

方 法

第一部分方法的建立

一、链亲合素（streptavidin）包被聚苯乙烯微孔板

二、生物素(Biotin)标记C192单抗

三、链亲和素包被微孔板和生物素化抗体的活性检测

四、辣根过氧化物酶(HRP)标记C192单抗

五、比较一步法和两步法

六、棋盘试验确定生物素化抗体与酶标抗体的最佳工作稀释度

七、反应的动力学研究

第二部分方法的鉴定和初步应用

结 果

第一部分方法的建立

一、链亲和素包被酶标板与生物素化抗体活性检测

二、辣根过氧化物酶标记抗体的标记质量与活性鉴定

三、一步法与两步法结果比较

四、棋盘试验确定生物素化抗体与酶标抗体的最佳工作稀释度

五、动力学研究结果

第二部分方法的鉴定和初步应用

一、测定标准曲线数据、灵敏度和精密度

二、确定最佳使用范围

三、稳定性实验

四、批内变异和批间变异检测结果

五、回收实验结果

六、线性实验结果

七、相关性研究

八、初步应用

附图

讨论

参考文献

致 谢