产超广谱β-内酰胺酶的肺炎克雷伯菌耐药分析

摘要

超广谱β-内酰胺酶(ESBL)是指由质粒介导的扩导到能水解头孢噻肟、头孢他啶、头孢曲松等三代头孢菌素以及氨曲南等单环类抗生素,并能被酶抑制剂抑制其水解活性的一类β-内酰胺酶.肺炎克雷伯菌是最常见的产ESBL的菌株,常引起院内感染和爆发流行.近年来该院肺炎克雷伯菌院内感染逐年增多,为了查明产ESBL肺炎克雷伯菌的耐药情况和其所产酶的分型,研究人员于1999年7月至1999年12月对院内分离的肺炎克雷伯菌进行了ESBL监测、耐药分析、接合实验以及所产的ESBL的等电点测定和编码ESBL的耐药基因的序列分析等研究.

目录

前言

第一部分——肺炎克雷伯菌的收集及其耐药性测定

材料和方法

1.材料及设备

2.菌种鉴定

3.琼脂稀释法测定MIC

4.数据分析及处理

5.琼脂稀释法MIC确证试验和纸片确证试验检出ESBL阳性的肺炎克雷伯菌

6.双纸片协同试验检出ESBL阳性的肺炎克雷伯菌

实验结果

1.产超ESBL肺炎克雷伯菌的检出以及各检出方法的比较

2.产ESBL和不产ESBL肺炎克雷伯菌的耐药模式分析

第二部分——ESBL阳性肺炎克雷伯菌的接合实验及其等电点的测定

材料和方法

一.接合实验

二.ESBL阳性肺炎克雷伯菌及接合子的等电点测定

实验结果

一.接合实验、接合子的鉴定及其耐药分析

二.野生株和接合子所产酶的等电点

第三部分——耐药基因的克隆和测序

材料和方法

1.材料及设备

2.引物设计

3.耐药基因的体外扩增(PCR)、连接及转化

4.转化子的质粒DNA的小量制备(碱裂解法)

5.转化子的鉴定

6.PCR产物的序列测定

实验结果

1.耐药基因的PCR结果

2.测序前酶切鉴定的结果

3.耐药基因测序的结果

实验讨论

一.产ESBL肺炎克雷伯菌的耐药是目前抗生素面临的挑战之一

二.监测产ESBL菌株对临床治疗的重要性

三.影响接合实验的因素

四.等电聚焦鉴别质粒介导的ESBL和AmpC酶

五.一种新的对头孢噻肟高活性的高pI的ESBL

结论

综述：超广谱酶(ESBL)的演变和传播

参考书

致谢