人δ蛋白基因启动子区-64位C→T点突变对其转录调控影响的研究

摘要

该室将人δ基因启动子区-64位C突变为T,恢复正常的CAAT样盒,转染人HeLa细胞,通过检测报告基因的表达,间接证实δ基因低水平表达与启动子区CAAT样盒缺陷有关.该室还通过凝胶迁移率改变实验(EMSA)研究了人δ珠蛋白基因启动子区-64位C→T点突变对DNA结合蛋白的影响,证明δ基因启动子区CAAT样盒的缺陷是引起δ基因低水平表达的重要因素,缺陷的CAAT样盒通过影响反式因子CP1和GATA-1的结合影响基因的表达.该工作将人δ基因启动子区-64位C突变为T后,克隆于去除强启动子CMV的真基因表达载体pcDNA3.1-/Myc(-)HisA中,分别将含野生型CAAT样盒和突变型CAAT样盒的人δ基因转染鼠红白细胞血病(MEL)细胞,经DMSO诱导表达,利用半定量RT-PCR技术,测得δ基因启动子区-64位C→T点突变后,含突变型CAAT样盒的人δ基因的转录水平是含野生型CAAT样盒的2.190±0.547倍.该研究在mRN水平直接证实δ基因启动子区CAAT样盒的缺陷是影响其转录的重要原因.用真核基因表达载体中与人δ基因融合表达的c-myc蛋白的单克隆抗体进行Westernblot,证实人δ基因在MEL细胞中可有效表达,且含突变型CAAT样盒的人δ基因的表达水平高于含野生型CAAT样盒的人δ基因的表达水平.

目录

前言

材料与方法

结果

讨论

小结

参考文献

英文名词及缩写

综述

参考文献

致谢