人红细胞源性降压因子对血管的保护作用及其机制的进一步研究

摘要

该论文旨在原有工作基础上探讨人红细胞源性降压因子（erythrocyte-derived depressing factor,EDDF）对钙超载(Calcium overload,CaO)造成的老年模型大鼠、左旋硝基精氨酸（L-N<'G>-nitro-arginine,L-NNA）诱导的高血压大鼠及两肾一夹（two kidney-one clip,2K-1C）肾性高血压大鼠血管的保护作用,并从整体、器官、细胞及分子水平探讨了EDDF的作用机制.结果提示EDDF能有效保护高血压大鼠及CaO大鼠的各级血管,减少由于钙超载所致的大鼠VSMCs超微结构损伤.并进一步揭示了EDDF的作用机制与减少2K-1C高血压大鼠VSMCs DNA合成、抑制VSMCs有丝分裂及其异常增殖有关,另外EDDF的降压机制还与其抑制VSMCs的PDGF-A链mRNA表达、降低细胞信号转导通路中ERK-1和ERK-2蛋白表达以及影响细胞周期调控蛋白的表达等机制密切相关.

目录

缩略词

1.前言

2.材料和方法

2.1.实验动物、药品和试剂

2.2.主要仪器与设备

2.3.EDDF纯化条件的改进

2.4.EDDF的结构及活性鉴定

2.5.钙超载(CaO)、L-NNA及2K-1C大鼠模型制备

2.6.大鼠血压及心脏系数的测定

2.7.大鼠离体血管环灌流实验

2.8.双光子显微镜(TPM)测定大鼠血管反应性

2.9.透射电镜观察CaO大鼠VSMCs的超微结构

2.10.大鼠胸主动脉VSMCs的培养

2.11.MTT法测定VSMCs增殖

2.12.[3H]-TdR掺入实验

2.13.细胞凋亡及细胞周期测定

2.14.RT-PCR法测定PDGF-A基因表达

2.15.蛋白质的SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳

2.16.SDS-聚丙烯酰胺凝胶银染

2.17.Westernblotting法测定几种信号调节蛋白表达

2.18.免疫组化法测定VSMCs中ERK-1蛋白含量

2.19.统计学方法

3.结果

3.1EDDF纯化谱图及其生物活性鉴定

3.1.1EDDF在几种条件下的纯化谱图

3.1.2EDDF对大鼠的降压作用

3.2EDDF对CaO大鼠及高血压大鼠血管的保护作用

3.2.1几种大鼠动物模型的一般表现

3.2.2大鼠血压及心脏系数比较

3.2.3EDDF对大鼠血管收缩功能的影响

3.2.4TPM下观察EDDF对NE引起的大鼠血管反应性的影响

3.2.5EDDF对CaO大鼠VSMCs超微结构的影响

3.3EDDF抑制2K-1C高血压大鼠VSMCs增殖的细胞与分子机制

3.3.1大鼠VSMCs的生长情况及鉴定

3.3.2EDDF抑制大鼠VSMCs增殖

3.3.3EDDF抑制大鼠VSMCs的DNA合成

3.3.4EDDF对大鼠VSMCs细胞凋亡及生长周期的影响

3.3.5EDDF抑制大鼠VSMCsPDGF-A链mRNA的表达

3.4EDDF对大鼠VSMCs信号转导通路的影响

3.4.1考马斯亮蓝法测定蛋白质含量的标准曲线

3.4.2银染观察大鼠VSMCsSDS-聚丙烯酰胺凝胶蛋白电泳

3.4.3EDDF对大鼠VSMCsMAPK蛋白表达的影响

3.4.4EDDF对大鼠VSMCs细胞周期调节蛋白的影响

3.4.5免疫组化法观察EDDF对大鼠VSMCsERK-1的影响

4.讨论

4.1改进EDDF的纯化条件

4.2EDDF对CaO大鼠及高血压大鼠血管的保护作用

4.2.1几种动物模型的特点

4.2.2EDDF对几种模型大鼠血管反应性的影响

4.2.3EDDF对大鼠肠系膜二级阻力血管反应性的影响

4.2.4在TPM下观察EDDF对激动剂所致收缩反应的抑制作用

4.2.5大鼠血管内、中、外膜三者的协同作用

4.2.6EDDF对大鼠VSMC超微结构的影响

4.3EDDF抑制高血压大鼠VSMCs增殖的细胞与分子机制

4.3.1EDDF对VSMCsDNA合成及细胞增殖的影响

4.3.2EDDF对大鼠VSMCs细胞凋亡及生长周期的影响

4.3.3EDDF抑制VSMCs内PDGF-A链mRNA的表达

4.4EDDF对VSMCs信号转导通路的影响

4.4.1EDDF对VSMCs细胞MAPK信号转导通路的影响

4.4.2EDDF对VSMCs细胞周期信号调节的影响

5.小结

6.参考文献

文献综述：丝裂原激活蛋白激酶及其与细胞增殖和高血压的关系

文献综述参考文献

博士生期间发表的论文及参加的学术会议

致谢