抗PGP单克隆抗体轻重链可变区基因及其应用

摘要

HIT3a是我所研制的鼠源性抗CD3的单克隆抗体,并已经过国际人类白细胞分化抗原协作组会议正式命名.PHMA02为本实验室自行研制的具有自主知识产权的抗PGP的鼠源性单克隆抗体我们克隆单克隆抗体HIT3a和PHMA02轻、重链可变区基因,构建表达了抗PGP×CD3diabody,并对其体内外活性进行深入研究.我们利用RT-PCR克隆了抗PGP单抗PHMA02的轻、重链可变区基因,并利用噬菌体抗体库技术构建了抗PGPscFv的抗体库并进行了筛选.筛选到的高亲和力克隆经序列测定和氨基酸序列分析为一典型的抗体序列.将筛选到的高亲和力抗体基因克隆到具有强启动子的PET28a(+)载体上进行表达,表达产物具有与抗原PGP特异结合的能力,但不抑制PGP外排泵的功能.在此基础上,利用抗体HIT3a和PHMA02轻、重链可变区基因,构建表达了抗PGP×抗CD3diabody,并实现了在大肠杆菌内的分泌性的高效表达,普通三角瓶表达培养,表达量可达4-5mg/L培养基.

目录

常见英文缩写

前言

实验材料和实验方法

实验材料

实验方法

实验结果

一、重组噬菌体抗体文库的建立和阳性克隆的筛选

二、抗PGP ScFv的表达、纯化及活性测定

三、抗PGP/抗CD3微型双功能抗体（Diabody)的构建及表达纯化

四、抗PGP/抗CD3 Diabody体内外活性的测定

讨论

结论

参考文献

综述1单克隆抗体与肿瘤治疗

综述2宿主微环境与肿瘤多药耐药和血管新生的关系

致谢

附页