纳米粒子介导的转基因技术在心梗后促血管重建的应用研究

摘要

本文采用由非病毒载体介导的转基因方法，即用包载pVEGF<,165>的聚乳酸-乙醇酸(PLGA)纳米粒子进行心梗后治疗性血管再生的基因治疗。首先在体外对原代培养的新生大鼠心肌细胞进行了转染实验，通过对转染细胞荧光显微镜下的观察及VEGFl6~nRNA表达的特异性检测，验证了pVEGF-PLGA纳米粒子介导心肌组织转基因的可行性，并对纳米粒子的缓释效果初步的评估；其次制备大鼠心梗模型，以此为心肌缺血的研究平台，通过心肌内直接注射的方式进行pVEGF-PLGA纳米粒子介导基因治疗的体内研究，分别对pVEGF-PLGA纳米粒子治疗组及单纯pVEGF质粒、空载PLGA纳米粒子对照组的治疗效果进行了综合评估：(1)通过RT-PCR检测了VEGF<,165> mRNA在缺血心肌组织的表达，证实纳米粒子介导转基因的可行性及基因表达的持续性，并结合免疫组化分析了VEGF<,165>表达的组织分布及表达细胞类型；(2)通过组织特异性PCNA免疫组化分析评估pVEGF-PLGA纳米粒子基因治疗促血管生成及维持新生血管存留、促进其成熟的作用；(3)通过天狼猩红染色、分析软件定量分析，对比评估了各组心梗区及心梗交界区纤维化的状况；(4)通过电镜观察探讨纳米转基因的可能机制；(5)对pVEGF<,165>-PLGA纳米粒子局部心肌注射是否能引起全身副反应进行检测，评估pVEGF-PLGA纳米粒子转基因的安全性。综合上述结果证实纳米转基因是一种安全有效的转基因方式，pVEGF-PLGA纳米粒子介导的基因治疗能有效促进心梗后缺血区心肌组织血管的生成及存留。 本研究首次较系统、全面的评估了这种新型转基因技术在缺血性心肌病治疗中的应用效果，为这一新型的非病毒载体介导的转基因技术在临床治疗性血管再生的应用提供了理论和实验形态学的相关依据。

目录

论文说明：缩略词

摘要

前言

第一部分纳米粒子介导的体外转染实验

一、材料与方法

二、结果和分析

三、讨论

四、小结

参考文献

第二部分纳米粒子介导的体内转染实验

一、材料与方法

二、结果和分析

三、讨论

四、小结

参考文献

论文综述

第一篇血管内皮生长因子的生物学活性及其应用基础

第二篇缺血性疾病与治疗性血管再生

第三篇PLGA纳米转基因系统及非病毒载体介导的基因转导

个人简历

致谢