拓扑异构酶Ⅰ抑制剂拓扑替康治疗难治/复发性急性髓系白血病的基础与临床研究

摘要

目的近年Ⅰ/Ⅱ期临床试验证实拓扑异构酶Ⅰ抑制剂拓扑替康(Topotecan，TPT)及含TPT的化疗方案对难治/复发性急性髓系白血病(AML)有效。为进一步证明TPT的作用机理，本研究采用MDS急性髓系白血病M2变细胞系MUTZ-1为实验对象，初步探讨了TPT对MUTZ-1细胞的体外增殖抑制及诱导凋亡作用，以及环磷酰胺(CTX)对TPT作用靶标Topo-ⅠmRNA表达水平的影响。此外，总结了由TPT组成的CAT(CTX、阿糖胞苷、TPT)方案治疗难治/复发性AML患者的疗效和不良反应。 方法1.采用MTT法测定TPT对MUTZ-1细胞的杀伤作用。 2.以流式细胞术AnnexinV测定、DNALadder分析以及电镜细胞超微结构观察等评价TPT对MUTZ-1细胞诱导细胞凋亡的作用。 3.以流式细胞术分析TPT对MUTZ-1细胞周期的影响。 4.半定量RT-PCR检测CTX对Topo-ⅠmRNA表达水平的影响。 5.CAT方案诱导治疗难治/复发性AML21例，计算缓解率、生存期，并分析相关预后因素。比较CAT与非CAT诱导方案骨髓抑制与支持治疗的差异。 结果1.5、10、20、40、80、160nmol/LTPT与MUTZ-1细胞共培养72h后细胞存活率呈剂量依赖性性下降，分别为(78.9±10.7)％、(69.2±4.7)％、(58.6±7.1)％、(49.9±7.6)％、(42.4±0.8)％和(23.7±9.8)％，各实验组与对照组(505.6±20.1)％之间的差异均有统计学意义(P＜0.05)。 2.不同浓度TPT作用不同时间后，AnnexinV表达增高，出现DNALadder，细胞超微结构显示典型的细胞凋亡形态学改变，说明TPT可诱导MUTZ-1细胞凋亡。 3.TPT使MUTZ-1细胞发生G2/M期阻滞，呈时间依赖性和剂量依赖性。 4.半定量RT-PCR发现0.224mmol/LCTX与MUTZ-1细胞共培养24h、48h和72h后，Topo-ⅠmRNA表达有上升趋势。 5.21例难治/复发性AML患者中2例死亡。总有效率68.42％，完全缓解率(CR)52.63％(10/19)，部分缓解率(PR)15.79％(3/19)。中位生存时间为9.94个月(1～18个月)。CR患者中位CR期为5.75个月(2.0～9.5个月)。第一个诱导治疗结束后的第7～14天骨髓原始细胞下降比例＞50％和50天内获得CR分别是影响患者总生存(OS)和无病生存(DFS)的一个有意义的指标(P＜0.05)。此外，CAT诱导治疗所致骨髓抑制及所需的对症支持治疗的程度与非CAT方案无显著差异(P值均＞0.05)。 结论1.TPT对MUTZ-1细胞的生长抑制呈剂量依赖性。 2.同一种药物的MUTZ-1与KG1a细胞的IC50值无统计学差别(P值均＞0.05)，提示MUTZ-1与KG1a细胞对TPT等8种抗白血病药物的敏感性相似。 3.诱导细胞凋亡是TPT的疗效机制之一。 4.发生G2/M期阻滞是TPT的作用机制之一。 5.CTX可上调Topo-Ⅰ表达，与TPT发挥联合抗白血病作用。 6.CAT方案为难治/复发性AML患者的一个有效且毒性可耐受的新治疗方案。

目录

摘要

第一章拓扑异构酶Ⅰ抑制剂拓扑替康对MUTZ-1细胞系体外作用的研究

第二章CAT方案治疗难治/复发性急性髓系白血病的临床观察

综述拓扑替康治疗难治/复发性急性白血病的认识现况

综述急性髓系白血病伴多系发育异常的认识现况

攻读学位期间发表的文章

英文缩写与代码

致谢