嵌合抗CD44抗体Fab'片断在大肠杆菌中的表达

摘要

HI44a(IgG2a)是一种鼠源性抗CD44单克隆抗体，其结合位点位于CD44分子胞外区临近透明质酸结合位点处。本室的研究发现：(1)HI44a能够有效诱导急性髓性白血病M2-M5亚型细胞的分化及凋亡；(2)HI44a能够抑制白血病细胞系THP-1增殖，诱导其凋亡；(3)HI44a的作用可能是通过抑制癌基因及抗凋亡蛋白的表达，增强特定的分化诱导因子的表达，降低线粒体膜电位实现的。(4)CD44是急性髓性白血病诱导分化及凋亡治疗的一个有效靶点。但是，HI44a是鼠源性单克隆抗体，直接应用于临床会引起人体对鼠源性抗体的免疫反应(HAMA反应)，这是鼠源性抗体应用于临床的主要障碍，而基因工程抗体较好地解决了这个问题。 因此，我们对抗CD44鼠源性单克隆HI44a进行了基因工程改造，利用PCR方法从抗CD44单链抗体(ScFv)表达载体PET-22b上扩增出抗CD44抗体轻链可变区基因(VL)、重链可变区基因(VH)，然后分别将VH、VL基因重组到含人轻链恒定区CL和人重链恒定区CH1的载体pYZL和pYZH中，构建成扩增载体pYZLcd44和pYZHcd44，最后应用内切酶切分别从pYZLcd44和pYZHcd44中消化下CL-VL、CH1-VH，将它们连接入表达载体pYZF中，构建嵌合抗CD44Fab'表达载体pYZFcd44，并在16c9菌中表达。大量发酵16c9菌，表达嵌合抗CD44Fab'蛋白。应用SDS-PAGE和Westernblotting的方法确认嵌合抗CD44Fab'蛋白有表达。从细菌周质腔中提取可溶性表达的蛋白，结果发现可溶性表达的抗CD44Fab'蛋白量非常微少，大部分为不可溶的包涵体表达。分别应用精氨酸-HCL和半胱氨酸/胱氨酸缓冲液对包涵体表达的抗CD44Fab，蛋白进行透析复性。

目录

前言

常见英文缩写

材料和方法

实验结果

讨论

结论

参考文献

综述1CD44靶向治疗急性髓系白血病(AML)的潜在价值

综述2抗CD44抗体治疗急性髓系白血病(AML)的研究进展

致谢