磷酸激酶RIOK2是APC/C复合物中的新成员

摘要

细胞周期的调控是当前国际上生命科学研究的重要内容和热点问题，细胞周期研究不仅是理解生命现象的重要途径，也是治疗癌症和肿瘤等疾病的必由之路。APC/C(arlaphase promoting coraplex/closome)，即胞周期后期促进复合物是广泛存在的调控细胞周期的E3泛素连接酶。APC/C在细胞的有丝分裂期后期激活，调控细胞完成有丝分裂。在哺乳动物细胞中APC/C是一个1.5MD的包含超过11个亚基的分子复合物，其中Ape2和Ape11发挥了催化核心的作用，Ape10有着介导底物识别的功能。 本文在酵母双杂交实验中发现了与Apc10结合的一个激酶，由于它与酵母中的Rio kinase2有着很高的同源性，所以称其为RIOK2。我们通过免疫共沉淀实验和GST-pulldowrl实验证明了RIOK2在真核细胞中通过氨基端的激酶区与Apc10结合，并发现它与Apc11结合。我们通过表达纯化RIOK2的羧基端部分，免疫新西兰大白兔制作了具有高灵敏度和特异性的抗体，为下一步实验打下了基础。 由于APC/C是调控细胞周期的主要复合物，我们在293T细胞中过表达RIOK2并结合细胞同步化技术，最后通过流式细胞术检测其对周期影响，发现RIOK2有将细胞滞留在G<,2>/M期的作用，需要进一步实验证实。

目录

论文说明：缩略语对照表

前言

实验材料

实验方法

主要前期工作结果

实验结果

一、抗RIOK2兔血清的制备

二、研究RIOK2和复合物中其他蛋白相互作用的GST-pulldown实验

三、研究RIOK2对细胞周期的作用

讨论

小结

参考文献

综述：泛素连接酶APC/C在细胞周期调控中的作用

致谢

个人简历

附录