亚临床状态肾上腺皮质肿瘤相关分泌功能研究

摘要

背景：
　　 肾上腺肿瘤是常见的内分泌肿瘤。随着B超及CT作为常规检查的普及，其患病率明显增加，临床上出现大量无功能及亚临床状态肾上腺肿瘤。目前肾上腺肿瘤的发生、发展的遗传和组织病理学特点仍不清楚，尤其对于指导临床治疗意义重大的一些问题尚不明确，其中尤为突出的问题是肾上腺亚临床状态、无功能状态及有功能状态肿瘤之间的相互关联。
　　 目前亚临床库欣综合征被定义为自主分泌糖皮质激素而没有典型库欣综合征临床表现的综合征。国内外对于亚临床状态肾上腺皮质肿瘤的认识与研究尚处于起步阶段。
　　 ACTH-R属于褪黑素受体超家族，与其他褪黑素受体家族成员不同的是ACTH-R只和ACTH特异性结合，而且分布上有高度的组织特异性，主要分布于肾上腺皮质。ACTH-R在种属间的高度同源性以及表达部位的高度特异性均提示其在肾上腺的发生、发展中有重要的作用，目前对于ACTH-R与肾上腺肿瘤相关性的认识尚有不足。
　　 既往有实验研究证实ACTH-R在不同肾上腺肿瘤中的表达有显著差异，提示ACTH-R异常可能参与了肾上腺皮质肿瘤中细胞的增殖和分化。本研究拟用分子生物学、免疫组织化学及电子显微镜观察相结合的方法重点研究ACTH-R，即黑皮质素受体2(MC2-R)在亚临床Cushing综合征及肾上腺无功能腺瘤中的分布特点，为研究ACTH-R与肾上腺肿瘤之间的关系提供证据。目前国内外暂无研究者进行过相关研究。
　　 目的：
　　 1、研究分析不同类型肾上腺肿瘤中ACTH-R的表达水平的差异。
　　 2、对亚临床库欣综合征与库欣综合征的异同进行深入研究，探讨两者关系。
　　 3、观察ACTH-R异常是否参与肾上腺皮质肿瘤中细胞的增殖和分化。
　　 4、探索通过免疫组化法区分不同类型肾上腺肿瘤的可行性。
　　 5、观察不同类型肾上腺肿瘤超微结构差异。
　　 方法：
　　 1、使用荧光实时定量RT-PCR方法检测不同类型肾上腺肿瘤组织中ACTH-R和内参β-actinmRNA的表达；比较不同组织中ACTH-RmRNA表达的差异，对ACTH-R在肾上腺皮质肿瘤中的表达行相关性分析。
　　 2、Polymer免疫组化染色法研究不同类型肾上腺肿瘤组织中ACTH-R的表达。
　　 3、电子显微镜观察不同类型肾上腺皮、髓质肿瘤超微结构差异。
　　 结果:
　　 1．ACTH-R/β-actinmRNA相对比值在正常肾上腺皮质中为0.961±0.164;醛固酮分泌瘤中为0.845±0.386，皮质醇分泌瘤中为0.636±0.104，亚临床皮质醇分泌瘤中为1.242±0.372，肾上腺皮质无功能瘤中为1.297±0.228。
　　 2．ACTH-R／β-actinmRNA相对比值在NFA及sub-CPA的表达显著高于正常肾上腺皮质、APA和CPA(P均＜0.01)，NFA及sub-CPA组间无显著性差异(P=0.539)，CPA中表达显著低于其他各组（P均＜0.05），APA中表达与正常肾上腺皮质无显著差异(P=0.214)。
　　 3．ACTH-RmRNA在嗜铬细胞瘤未见表达。
　　 4．免疫组化显示ACTH-R在各组肾上腺组织中的表达有差异。
　　 5．肾上腺皮质腺瘤具有部分共同的电镜特点。
　　 6．不同类型肾上腺肿瘤分泌颗粒不同，电镜差异明显，透射电镜等技术可为深入研究不同亚型肾上腺皮质肿瘤临床表现差异提供细胞超微病理学资料。
　　 7．肾上腺皮、髓质肿瘤的电镜表现有显著差异。
　　 结论：
　　 1．亚临床库欣综合征是一种独立疾病，是否进展为库欣综合征可能有多因素决定，其中ACTH-R的差异表达可能是决定因素之一。
　　 2．亚临床皮质醇分泌瘤及肾上腺无功能瘤肿瘤细胞分泌功能不活跃可能与肿瘤高表达ACTH-RmRNA从而协调抑制类固醇合成酶的转录有关。
　　 3．ACTH-RmRNA可能不参与嗜铬细胞瘤的发生和发展。
　　 4．亚临床肾上腺皮质醇分泌瘤中ACTH-RmRNA比值显著高于皮质醇分泌瘤(p＜0.01)，但出现组内差异表达，提示部分肿瘤可能进展为分泌功能活跃的皮质醇分泌瘤。
　　 5．应用免疫组化可以辅助判定肾上腺肿瘤的分泌功能。
　　 6．不同类型肾上腺肿瘤电镜变现差异显著，电镜可以作为补充手段协助判断肾上腺肿瘤类型。