糖尿病患者高密度脂蛋白中血清淀粉样蛋白A的分布及其抑制粘附分子表达的相关性研究

摘要

2型糖尿病病人最大的死亡原因来自于冠脉事件，其冠心病死亡风险与既往发生过急性心梗的患者相当。在糖尿病患者体内，内皮功能受损促进了早期粥样斑块形成。
　　 白细胞向血管壁内的迁移运动是发生冠脉粥样硬化早期的重要过程。损伤后的内皮增加了细胞粘附分子的表达，如血管细胞粘附分子(vascular cell adhesionmolecule-1，VCAM-1)、细胞间粘附分子(intracellular adhesion molecule-1，ICAM-1)等，这些粘附分子介导白细胞牢固的粘附在内皮细胞上并最终穿过内皮完成迁移过程，随着迁移到内皮下的白细胞增多，粘附分子促进了粥样斑块的形成。有研究证实无论是分离自人类血浆的HDL还是在体外人工合成的HDL都有抑制内皮细胞表达粘附分子的作用，并且具有浓度及时间依赖性。
　　 本研究旨在比较糖尿病及冠心病患者与正常人HDL对粘附分子抑制功能的影响，并且研究其与HDL中SAA、apoA1含量改变的相关性。
　　 目的：
　　 本实验的目的在于收集正常人群、糖尿病人群、冠心病人群和糖尿病合并冠心病人群血浆，分离HDL成分，检测其对粘附分子表达数量及细胞粘附功能的影响，并明确SAA及apoA1含量变化与抑制粘附功能改变的相关性。
　　 方法：
　　 1.收集单纯糖尿病患者、糖尿病合并冠心病患者以及单纯冠心病患者血浆样本；
　　 2.通过密度梯度离心分离脂蛋白；
　　 3.用酶联免疫吸附(ELISA)方法检测各种脂蛋白的SAA及apoA1的含量；
　　 4.脐静脉内皮细胞中加入不同患者的HDL，孵育4小时，再加入TNF-α刺激4小时，抗人CD54-PE单克隆抗体标记后流式细胞仪检测平均荧光强度，从而获得其ICAM-1表达水平；
　　 5.脐静脉内皮细胞中加入不同患者的HDL，孵育4小时，再加入TNF-α刺激4小时，抗人CD106-PE单克隆抗体标记后流式细胞仪检测平均荧光强度，从而获得其VCAM-1表达水平；
　　 6.脐静脉内皮细胞中加入不同患者的HDL，孵育4小时，再加入TNF-α刺激24小时后加入Calcein-AM荧光染色剂标记的rHP-1细胞，流式细胞仪检测平均荧光强度，从而获得其粘附细胞数量；
　　 7.应用SPSSV11.5软件，采用非参数检验和t检验分析处理检测结果，进行相关性分析。
　　 结果：
　　 1.入选患者各组间基础人口统计学特点、临床生化指标和既往病史无明显统计学差异(p>0.05)；
　　 2.HDL中SAA含量在正常人群中较低，在单纯糖尿病、单纯冠心病及糖尿病合并冠心病患者中较高(p-0.001)；
　　 3.与TNF-α刺激试剂对照组相比，正常人群对照组、糖尿病患者组、冠心病患者组及冠心病合并糖尿病患者组ICAM-1表达水平均明显下降(P<0.05)。
　　 4.与TNF-α刺激试剂对照组相比，正常人群对照组及各患病组VCAM-1表达水平均明显下降(P<0.01)。与加入正常人群HDL的对照组相比，糖尿病合并冠心病患者组VCAM-1表达水平明显下降(p=0.026)；
　　 5.与TNF-α刺激试剂对照组相比，正常人群对照组及单纯冠心病患者对照组THP-1平均荧光强度显著降低(pn=0.012、pc=0.017)。与正常人群对照组相比，单纯糖尿病组THP-1平均荧光强度明显升高(p=0.038)；
　　 6.HDL中apoAl对粘附因子表达数量及THP-1粘附功能没有明显影响。
　　 结论：
　　 1.正常人群HDL中SAA的含量明显低于单纯糖尿病人群、单纯冠心病人群及糖尿病合并冠心病人群；而在糖尿病及冠心病人群中，HDL的SAA含量并无明显差异；
　　 2.正常人群、单纯冠心病患者、单纯糖尿病患者及糖尿病合并冠心病患者对ICAM-1表达均有明显抑制作用；
　　 3.正常人群、单纯冠心病患者、单纯糖尿病患者及糖尿病合并冠心病患者的HDL对VCAM-1表达均有明显抑制作用，其中糖尿病合并冠心病患者HDL的抑制作用最强:4.正常人群、单纯冠心病患者、单纯糖尿病患者及糖尿病合并冠心病患者的HDL对THP-1的粘附均有抑制作用，其中正常人和单纯冠心病患者的HDL抑制作用最明显；
　　 5.HDL中SAA及apoA1含量与其抑制粘附作用无明显关系。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：缩写词表

前言

实验材料

实验方法

实验结果

讨论

结论

参考文献

综述：细胞粘附分子与动脉粥样硬化

致谢