无菌豚鼠的培育及无菌豚鼠EV71比较医学研究

摘要

豚鼠是一种应用广泛的实验动物。可以用于免疫学、传染病、药物学、儿科学等方面的研究。无菌豚鼠在生物医学实验中因为排除了病原体和环境因素的影响，受抗原刺激时，免疫反应强烈且单一，因此在生命科学研究中有着广阔的应用前景。1932年Reyniers获得无菌豚鼠。我所自1980年开始研究无菌豚鼠并培育成功，为我国无菌豚鼠的发展和应用奠定了基础。但限于当时的生物医学发展水平，国内对无菌豚鼠的需求较少，而没能进行规范化培育与推广、应用。随着生命科学的发展和生物医学的进步，重大疾病特别是重大传染病研究的深入，无菌豚鼠将逐渐显示出其重要价值。
　　 EV71是一种含有正向RNA单链无包膜病毒，属于肠道病毒属，小核糖核酸病毒科。EV71和CA10、CA16等共属于A性肠道病毒，容易引起手足口病。但是EV71的感染有时会产生严重的神经系统疾病，如无菌性脑炎、脑干脑炎、和脊椎灰质炎相似的麻痹。自1974年首次报道以来，EV71已在世界范围内引起十多次爆发与流行。例如澳大利亚、欧洲、亚洲和美国。近年来在亚太地区有上升的趋势。虽然HFMD的流行性很强，但是对其致病机理以及感染后比较医学方面的研究很少。其主要原因之一是EV71很难感染动物，制作成稳定的动物模型。并且国内外建立成功的动物模型多为出生七日以内的乳鼠，难以采集血液、器官材料进行比较医学方面的研究。
　　 基于以上理由，本论文开展了无菌豚鼠制作技术的规范化和无菌豚鼠EV71比较医学的研究。
　　 无菌豚鼠制作技术的规范化实验采取子宫摘除术的方法对普通级豚鼠进行剖腹净化，在无菌隔离器内剥离子宫取仔，用人工哺乳的方法将仔豚鼠培育成无菌豚鼠，并每隔一段时期进行无菌检测。以保证无菌豚鼠的质量。同时对孕豚鼠、豚鼠子宫摘除手术日期、豚鼠人工乳、人工饲料等进行对比选择。40日左右时，分别对动物心脏取血，自动生化分析仪测定无菌豚鼠、普通级豚鼠血液学参数。比较三组动物血常规、血生化有无差异。为无菌豚鼠的应用和推广奠下基础。
　　 无菌豚鼠EV71比较医学研究实验利用第一部分得到的无菌豚鼠作为模型动物，利用多种接种方法接种病毒。分别进行临床观察、病原学检查，用来验证动物感染动物模型成立。同时对不同组感染后动物模型的一些免疫指标如：EV71特异性抗体，动物基础性IgG、IgA、IL-2、IL-6水平及CD4/CD8变化进行比较分析。感染了EV71的无菌豚鼠出现疱疹、腹泻等临床症状，普通豚鼠无明显的临床症状。病原学检测无菌豚鼠100％感染病毒，在多个组织中可检测到病毒；普通豚鼠病毒检出率低并无明显的规律性。免疫学检测中，首次发现无菌豚鼠在EV71感染后血清中无特异性抗体产生，但是基础抗体值增加；普通豚鼠血清中检测出特异性抗体，且基础抗体值增高程度较无菌豚鼠高，具体原因不明。CD4/CD8比值升高，且CD4、CD8细胞数均有不同程度的降低。疱疹出现处的组织有明显的水肿现象，无炎性因子浸润。结果表明无菌豚鼠更易感染EV71病毒。无菌豚鼠和普通豚鼠在感染病毒后免疫指标检测结果差异大，需要进一步的探讨其原因。本文首次尝试使用无菌豚鼠作为EV71感染动物模型，为以后无菌豚鼠感染模型的使用提供参考。

目录

文摘

英文文摘

第一部分 无菌豚鼠的培育和不级同别豚鼠生物学特征的比较

前 言

实验材料

实验方法

实验结果

讨论

结论

第二部分 EV71病毒感染的比较医学研究

前言

实验材料

实验方法

实验结果

讨论

结论

参考文献

附 录

致 谢