Notch-1信号通路与胰腺癌吉西他滨化疗耐药及胰腺癌临床病理预后特征相关性的研究

摘要

目的:胰腺癌是消化系统中恶性程度较高、预后极差的肿瘤,其发生发展机制尚未阐明。吉西他滨单药或联合应用是目前中晚期胰腺癌综合治疗体系中的重要组成部分,然而吉西他滨化疗耐药始终成为胰腺癌治疗效果不佳的主要原因之一。Notch信号通路被认为在不同细胞中扮演着各种不同的“细胞命运决定者”的角色,并发现参与了多种肿瘤化疗耐药的形成以及在肿瘤的发生与进展中发挥重要作用。本研究拟探讨Notch-1信号通路与胰腺癌吉西他滨化疗耐药之间的关系,以及Notch-1表达水平与胰腺癌临床病理特点及预后的关系。
　　 材料与方法:选用胰腺癌细胞株AsPC-1、BxPC-3、MIAPaCa-2作为实验研究对象,Real-time PCR和Western blot检测吉西他滨作用前后Notch-1信号通路表达水平变化。应用γ分泌酶抑制剂、Notch-1 siRNA下调Notch-1信号通路以及转染人Notch-1胞内段(NICD)基因质粒上调Notch-1信号通路活性,观察干预前后吉西他滨化疗敏感性的变化。通过Annexin V/PI双染法检测凋亡、Caspase-3活性测定以及Westernblot检测凋亡通路相关调控蛋白Bax、Bcl-2、Bcl-XL在阻断Notch-1信号通路前后吉西他滨作用时表达水平的变化。同时收集北京协和医院行手术治疗的73例胰腺导管腺癌标本,采用免疫组织化学方法检测Notch-1在癌组织与癌旁组织中的表达情况并评价其与患者临床病理以及预后指标的相关性。
　　 结果:吉西他滨作用于胰腺癌细胞时Notch-1信号通路被激活；阻断Notch-1信号通路可使吉西他滨化疗敏感性增加,而激活Notch-1信号通路可降低吉西他滨化疗敏感性,促进耐药；阻断Notch-1信号通路后吉西他滨作用时细胞凋亡率明显增高,Caspase-3活性明显增高,促凋亡蛋白Bax表达水平上调,抑凋亡蛋白Bcl-2、Bcl-XL表达水平下降。Notch-1在胰腺癌肿瘤中呈高表达,并与远处转移相关。Kaplan-Meier生存分析显示Notch-1阳性表达提示患者预后不良,单因素及多因素分析证实其为影响预后的独立危险因素。
　　 结论:阻断Notch-1信号通路可通过内部应激途径激活凋亡通路促进凋亡从而增加胰腺癌吉西他滨化疗敏感性。Notch-1阳性表达与肿瘤转移相关,提示患者预后不良,可作为预测预后的独立指标。