桂枝茯苓胶囊及其单味药茯苓化学成分和生物活性研究

摘要

桂枝茯苓胶囊为我国传统的纯中药制剂，由桂枝、牡丹皮、桃仁、赤芍和茯苓五味药组成。它有抑制血小板聚集，降低血粘度，缓解子宫痉挛，镇痛等作用，能活血化瘀，缓消症块，用于治疗妇科血瘀症，子宫肌瘤，慢性盆腔炎，卵巢囊肿，痛经等，我们对其粗提物进行了药理活性的筛选，表明具有酪氨酸蛋白激酶抑制作用、C33A宫颈癌细胞生长抑制活性、DPPH抗氧化筛选和血清诱导血管平滑肌细胞增殖抑制活性，并对其活性部位进行了化学成分的研究。
　　 作为其中的一味主药，茯苓(Poriacocos(Schw.)Wolf)为多孔菌科真菌茯苓的干燥菌核，我国资源丰富，全国各地均有栽培，主产湖北、安徽、云南等省。其性平，味甘、淡，归心、肺、脾、肾经，具有怯湿利水、健脾和胃、宁心安神的作用，多用于治疗小便不利，水肿胀满，痰饮咳逆，脾胃气虚，食少便溏，体倦乏力以及心神不安，惊悸，失眠等症。我们对其粗提物进行了肿瘤坏死因子生产抑制模型和C33A宫颈癌细胞生长抑制活性模型的筛选，发现茯苓乙醇提取物的乙酸乙酯部分和正丁醇部分有一定的活性。
　　 本研究运用多种色谱技术和波谱技术，并结合化学方法，主要对茯苓乙醇提取物的乙酸乙酯部分和正丁醇部分以及桂枝茯芩胶囊的正丁醇和水部分进行了系统的化学成分研究。从茯苓中共分离鉴定了41个化合物，分别为pachymicacid(1)，eburicoicacid(2),tumulosicacid(3),trametenolicacid(4),dehydropachymicacid(5),dehydrotumulosicacid(6),dehydroeburicoicacid(7),dehydrotrametenolicacid(8),3-epi-dehydropachymicacid(9),3-epi-dehydrotumulosicacid(10),polyporenicacidC(11),6α-hydroxy-polyporenicacidC(12),6a-hydroxy-dehydrotumulosicacid(13),3βacetyl-16α-hydroxydehydrotrametenolicacid(14),pachymicacidmethylester(15),palmiticacid(16),oleanicacid(17),carbocericacid(18),ergosta-5,7,22-trien-3p-ol(19),ergosta-6,22-diene-5,8-epidioxy-3-01(20),3,5-dehydroxyergosta-7,22-dien-6-one(21),3β,5α,9α-trihydroxy-ergosta-7,22-diene-6-one(22),ergosta-7,22-diene-3-one(23),6,9epoxy-ergosta-7,22-diene-3-o1(24),ergosta-4,22-diene-3-one(25),3p,Sa,6β-trihydroxyl-ergosta-7,22-diene(26),ergosta-5,6-epoxy-7,22-dien-3-01(27),ergosta-4,6,8(14),22-tetraen-3-one(28),β-amyrinacetate(29),α-amyrinacetate(30),daucosterol(31),β-sitosterol(32),adenosine(33),ribitol(34),mannitol(35),oleanicacid3-o-acetate(36),a-D-glucose(37),α-D-Galactose(38),trehalose(39),galactitol(40),histidine(41),其中13为新化合物，化合物21-27,30,32,34-36,39-40为首次从该植物中分离得到；从桂枝茯苓胶囊中分离得到17个化合物，分别是oypaeoniflora(42)，caffeicacid(43),mudanpiosideF(44),guanosine(45),alanine(46),leucine(47),proline(48),arginine(49)，9个与茯苓中重复的化合物是5,6，9，10，11,33,37,39,40。
　　 对茯苓中分得的部分单体化合物进行了活性筛选，采用MTT法测定了茯苓中分离得到的15个化合物对七种人肿瘤细胞(A549:人肺腺癌细胞；Bel-7402:人肝癌细胞；BGC-823：人胃癌细胞；HCT-8:人结肠癌细胞；A-2780:人卵巢癌细胞；KB:人鼻咽癌细胞；MCF-7:人乳腺癌细胞）的抑制作用。结果显示5个化合物(化合物2,3,4，16，20)对人癌细胞有抑制作用。
　　 另外本文还阐述了高效液相色谱法测定桂枝茯苓胶囊中茯苓的4种化合物5,6，9，11的含量。本研究建立了HPLC法同时对桂枝茯苓胶囊中化合物5,6，9，11的含量测定，方法采用C18反相色谱柱，以乙腈一水(0.2％HCOOH)梯度洗脱方法，流速1ml.min-1，在242nm波长处检测4种有效成分的含量。四种成分的线性范围为dehydropachymicacid:0.192-0.96μg;dehydrotumulosicacid:0.408-2.04μg;3-epidehydropachymicacid:0.078-0.39μg;polyporenicacidC:0.0756-0.378μg;方法的样品回收率为96.3％，101.0％，98.5％和99.6％，样品的精密度为：1.2％，0.2％，0.2％，0.6％。建立的HPLC法能简便快速的测定桂枝茯苓胶囊中有效成分的含量，为完善该制剂的质量控制方法提供了参考。

目录

摘要

前言

第一章 茯苓的化学成分和生物活性研究概况

第一节 茯苓化学成分研究概况

第二节 茯苓生物活性研究概况

第二章 桂枝茯苓胶囊及其单味药茯苓化学成分和生物活性研究

第一节 桂枝茯苓胶囊及茯苓化学成分研究结果

一、乙酸乙酯部分化学成分研究结果

二、正丁醇部分化学成分研究结果

三、桂枝茯苓胶囊化学成分研究结果

第二节 新化合物的结构研究

化合物13 6α-hydroxy-dehydrotumulosic acid 的结构鉴定

第三节 已知化合物的结构研究

化合物1 pachymic acid 的结构鉴定

化合物2 eburicoic acid 的结构鉴定

化合物3 tumulosic acid 的结构鉴定

化合物4 trametenolic acid 的结构鉴定

化合物5 dehydropachymic acid 的结构鉴定

化合物6 dehydrotumulosic acid 的结构鉴定

化合物7 dehydroeburicoic acid 的结构鉴定

化合物8 dehydrotrametenolic acid 的结构鉴定

化合物9 3-epi-dehydropachymic acid 的结构鉴定

化合物10 3-epi-dehydrotumulosic acid 的结构鉴定

化合物11 polyporenic acid C 的结构鉴定

化合物12 6α-dehydropolyporenic acid C 的结构鉴定

化合物14 3β-acetyl-16α-hydroxy-dehydrotrametenolic acid 的结构鉴定

化合物15 pachymic acid methyl ester 的结构鉴定

化合物16 palmitic acid 的结构鉴定

化合物17 oleanic acid 的结构鉴定

化合物18 carboceric acid 的结构鉴定

化合物19 ergosta-5,7,22-trien-3β-ol 的结构鉴定

化合物20 ergosta-6,22-diene-5α,8α-epidioxy-3-ol)的结构鉴定

化合物21 3β,5α-dihydroxyergosta-7,22-dien-6-one 的结构鉴定

化合物22 3β,5α,9α-trihydroxyergosta-7,22-diene-6-one 的结构鉴定

化合物23 ergosta7,22-diene-3-one 的结构鉴定

化合物24 6,9-epoxy-ergosta-7,22-diene-3β-ol 的结构鉴定

化合物25 ergosta-4,22-diene-3-one的结构鉴定

化合物26 3β,5α,6β-trihydroxyergosta-7,22-diene 的结构鉴定

化合物27 ergosta-5,6-epoxy-7,22-dien-3-ol 的结构鉴定

化合物28 ergosta-4,6,8(14),22-tetraen-3-one 的结构鉴定

化合物29 β-amyrin acetate 的结构鉴定

化合物30 α-amyrin acetate 的结构鉴定

化合物31 β-daucosterol)的结构鉴定

化合物32 β-sitosterol 的结构鉴定

化合物33 adenosine 的结构鉴定

化合物34 ribitol 的结构鉴定

化合物35 mannitol 的结构鉴定

化合物36 oleanic acid 3-acetate 的结构鉴定

化合物37 α-D-glucose 的结构鉴定

化合物38 α-D-galactose 的结构鉴定

化合物39 trehalose 的结构鉴定

化合物40 galactitol 的结构鉴定

化合物41 histidine 的结构鉴定

化合物42 oypaeoniflora 的结构鉴定

化合物43 caffeic acid 的结构鉴定

化合物44 mudanpioside F 的结构鉴定

化合物45 guanosine 的结构鉴定

化合物46 alanine 的结构鉴定

化合物47 leucine 的结构鉴定

化合物48 proline 的结构鉴定

化合物49 arginine 的结构鉴定

第四节 桂枝茯苓胶囊中4种三萜酸的含量测定

1 桂枝茯苓胶囊HPLC分析方法

2 分析方法

3 方法学实验

4 讨论

第五节 桂枝茯苓胶囊及其单味药茯苓化合物生物活性评价

1 桂枝茯苓胶囊粗提物活性研究

2 茯苓粗提物的生物活性研究

3 茯苓单体化合物的生物活性研究

第三章 结果与讨论

第一节 茯苓化学成分研究

第二节 茯苓中三萜类化合物的结构问题

参考文献

第四章 实验部分

第一节 茯苓的植物来源与鉴定

第二节 实验仪器与试剂

第三节 茯苓的提取与分离流程

第四节 化合物鉴定数据

致谢

已发表及待发表论文

附图

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