对比中、美胰腺神经内分泌肿瘤临床病理特点的异同探索诊断和预后判断的标志物

摘要

第一部分血清铬粒素A对胰腺神经内分泌肿瘤的诊断价值
　　研究目的:
　　胰腺神经内分泌肿瘤(pancreatic neuroendocrine tumors, PNETs)是一类少见肿瘤，但近年来欧美和亚洲的发病率均呈现上升趋势。铬粒素A(chromogranin A，CgA)是诊断PNETs有效的血清标志物，在欧美已广泛应用于临床诊断，但国内的相关研究很少，目前中国国家食品药品监督管理总局还没有批准检测外周血CgA应用于临床诊断PNETs。我们在研究中意外地发现血清CgA浓度在胰岛素瘤和非胰岛素瘤PNETs之间存在着巨大的差别，临床实践中这一点尚未得到应有的关注。本研究的目的就是评估血清CgA对不同亚类PNETs特别是胰岛素瘤患者的诊断价值。
　　研究方法:
　　用ELISA方法检测57例胰岛素瘤患者、32例非胰岛素瘤PNETs患者和86位健康志愿者的血清CgA水平，绘制受试者工作特征(receiver operatingcharacteristic，ROC)曲线来评估其诊断价值。用免疫组化检测26个PNETs组织的CgA表达。按照欧洲神经内分泌肿瘤学会(European Neuroendocrine TumorSociety, ENETS)制定的标准进行肿瘤分级和分期。
　　研究结果:
　　89例PNETs患者的血清CgA水平显著高于健康对照组(P=7.2×10-9)。57例胰岛素瘤患者的血清CgA水平(中位数为64.8 ng/ml，范围25.0-164.2 ng/ml)略高于健康对照组(中位数为53.4 ng/ml，范围39.1-94.1 ng/ml)，显著低于非胰岛素瘤PNETs患者(中位数为192.5 ng/ml，范围26.9-9020.7 ng/ml)，P=0.001。ROC曲线分析显示血清CgA浓度为60.4 ng/ml时，诊断胰岛素瘤的灵敏度和特异性分别为66.7％和73.3％;而血清CgA浓度为73.9 ng/ml时，诊断非胰岛素瘤PNETs的灵敏度和特异性分别为65.6％和91.9％。
　　研究结论:
　　血清CgA是诊断非胰岛素瘤PNETs患者的可靠分子标志物，但不适合诊断胰岛素瘤。
　　第二部分中、美胰腺神经内分泌肿瘤临床病理特征的异同和判断预后的临床病理指标
　　研究目的:
　　胰腺神经内分泌肿瘤(pancreatic neuroendocrine tumors，PNETs)是一类少见肿瘤，但近年来欧美和亚洲的发病率均呈现上升趋势。欧美神经内分泌肿瘤学会制订的分级和分期系统是否适用于判断中国PNETs患者的预后，欧美PNETs患者的临床病理特征与中国患者有无差异，未见文献报道。本研究的主要目的是比较中、美PNETs患者临床病理特征和预后的异同并评估预判PNETs患者预后的临床病理指标。
　　研究方法:
　　肿瘤分级和分期按照欧洲神经内分泌肿瘤学会(ENETS)制定的标准。运用t检验、非参数检验、x2检验或Fisher精确检验等统计学方法，比较517例中国PNETs患者和450例美国PNETs患者临床病理特征的异同。运用Kaplan-Meier生存分析和Cox回归模型分析来评估判断预后的临床指标。
　　研究结果:
　　1、中国PNETs患者的中位发病年龄比美国患者年轻，表现在:无功能PNETs，46岁vs.57岁，P=1.2×10-15;功能性PNETs，46岁vs.53岁，P=0.003;胰岛素瘤，46岁vs.54岁，P=0.033;非胰岛素瘤PNETs，46岁vs.56岁，P=5.4×10-15。
　　2、中国无功能PNETs的直径中位数比美国的大，4 cm vs.3 cm，P=2.1×10-9。
　　3、中、美PNETs的原发部位有差异。65.2％的美国无功能PNETs发生在胰腺体尾部，而55.9％的中国无功能PNETs发生在胰腺头颈部，二者差异显著(P=2.8×10-6)。73.9％的美国胰岛素瘤发生于胰腺体尾部，而52.1％的中国胰岛素瘤发生在胰腺体尾部，二者差异明显(P=0.006)。
　　4、分析发现，PNETs患者的肿瘤分级高、分期高、Ki-67指数升高、肿瘤大以及发生转移，他们的预后则差。Cox分析发现，肿瘤分级和分期是PNETs患者总生存的独立影响因素(P值分别为3.12×10-8和8.25×10-6)，也是无病生存的独立影响因素(P值分别为5.37×10-16和3.54×10-5)。
　　5、性别是美国PNETs患者总生存的独立影响因素，女性患者的总生存更长(P=0.042)，但是中国患者总生存与性别无关。
　　研究结论:
　　中、美两国PNETs患者的临床病理特征存在明显差异。肿瘤分级和分期是判断PNETs患者预后的可靠临床病理指标。
　　第三部分胰腺神经内分泌肿瘤预后分子标志物探索
　　研究目的:
　　临床病理指标能有效地判断PNETs患者的预后，但有一定的局限性。我们以往胰岛素瘤蛋白质组学研究发现蛋白α-internexin和UCH-L1在肿瘤中表达，且α-internexin可以判断PNETs患者的总生存，但不适合判断无病生存。本研究的第一个目的是在两个独立队列中验证该两种蛋白共同表达可否更好地判断PNETs预后。2011年美国报道DAXX基因突变与PNETs预后好相关，DAXX突变导致蛋白表达缺失。2014年瑞士的研究则认为DAXX突变导致的DAXX蛋白表达下调和PNETs预后差相关。鉴于此不一致的结论，本研究的第二个目的是在较大的PNETs样本中检测DAXX蛋白表达并明确其表达和患者预后的关系，同时测定DAXX和α-internexin两种蛋白的共同表达并评判其表达和预后的关系。
　　研究方法:
　　用免疫组化染色方法检测UCH-L1和α-internexin两种蛋白在286个肿瘤组织中的表达，并在两个独立PNETs队列中分析这两种蛋白同时表达与临床病理特征和预后的关系。免疫组化检测295个PNETs组织的DAXX蛋白表达。分析DAXX表达、DAXX和α-internexin同时表达及以上三种蛋白同时表达与PNETs患者临床病理特征及预后的关系。用Sanger法检测PNETs患者的DAXX基因外显子突变。
　　研究结果:
　　在两个独立队列和总队列中，UCH-L1和α-internexin两种蛋白在PNETs中同时表达与患者的预后好显著相关(log rank P=8.77×10-5)。 DAXX表达阳性与PNETs患者无病生存延长显著相关(P=4.78×10-5)。DAXX和α-internexin两种蛋白同时表达不仅与PNETs患者无病生存延长显著相关(P=0.03)而且与较好的总生存显著相关(P=0.009)。UCH-L1、α-internexin和DAXX三种蛋白同时表达与PNETs患者较好的无病生存显著相关(P=0.002)。
　　研究结论:
　　同时测定两种蛋白比检测单一蛋白能更好地判断PNETs患者的预后，UCH-L1和α-internexin两种蛋白是独立判断PNETs患者预后的分子标志物，同样DAXX和α-internexin两种蛋白同时表达和患者较好的预后相关。同时测定三种蛋白的表达判断患者的预后，特异性更高。

目录

研究背景、课题设计和发现

第一部分 血清铬粒素A对胰腺神经内分泌肿瘤的诊断价值

摘要

前言

研究对象和实验材料

实验方法

实验结果

讨论

结论

第二部分 中、美胰腺神经内分泌肿瘤临床病理特征的异同和判断预后的临床病理指标

摘要

前言

研究对象

实验方法

实验结果

讨论

结论

第三部分 胰腺神经内分泌肿瘤预后分子标志物探索

摘要

前言

研究对象和实验材料

实验方法

实验结果

讨论

结论

全文总结

参考文献

英文缩略词表

文献综述 DAXX／ATRX与肿瘤

致谢

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