水动力技术对移植脂肪存活影响的研究

摘要

自体脂肪组织来源丰富，易于获取，且移植后无免疫排斥反应，被认为是理想的软组织填充材料，广泛的应用于整形外科领域。然而，伴随着自体脂肪移植技术越来越广泛的应用，自体的脂肪组织在软组织填充方面的不足也逐渐显现出来，其中，移植的脂肪组织在受区不能完全存活成为最为困扰整形医师的难题。脂肪移植物的坏死、吸收以及相关并发症的发生严重影响移植手术的效果，因此，如何促进移植脂肪的存活成为整形外科领域研究的热点课题。
　　自体脂肪移植物的采集、纯化及注射过程均会对移植物造成一定程度的损伤，从而影响移植脂肪的存活。近20年来，学者们针对自体脂肪移植技术进行了大量的研究，希望找到最利于移植脂肪存活的技术。水动力技术是一种自体脂肪移植物采集技术，近几年被越来越多的应用于脂肪移植手术过程中，临床医师认为其操作简便，采集的脂肪颗粒更为细小均匀，利于注射。然而，国内、外却鲜有关于水动力技术用于脂肪移植的基础以及临床研究报道。应用水动力技术采集的脂肪移植物与常规负压技术采集的移植物有什么区别？两者移植后在体内的存活是否存在差异？不同纯化方式对水动力脂肪移植物的存活产生什么影响？解答这些问题，对水动力技术在脂肪移植领域的应用至关重要。
　　目的:1、比较研究水动力技术与常规负压技术对移植脂肪存活的影响:
　　(1)体外比较研究水动力技术与常规负压技术采集的脂肪移植物的区别;
　　(2)体内比较研究水动力技术与常规负压技术采集的脂肪移植物在移植之后的存活是否存在差异。
　　2、比较研究不同纯化技术对水动力脂肪移植物及其移植后存活的影响。
　　方法:1.水动力技术与常规负压技术对移植脂肪存活影响的比较研究
　　选择健康女性志愿者的双侧髂腰部或大腿部为脂肪供区。由同一术者在志愿者双侧术区的对应部位分别应用水动力技术及常规负压技术采集获得水动力组（A组）及常规组（B组）脂肪移植物标本。
　　(1)两种技术采集的脂肪移植物的体外比较研究:来自同一志愿者的两组脂肪移植物分别进行比较研究，通过HE染色比较两组标本的形态完整性;通过MTT实验及葡萄糖转移实验比较两组脂肪移植物的活力;通过流式细胞分析技术比较两组移植物中提取的基质血管成分(SVF)细胞中脂肪组织来源干细胞比例;通过荧光定量PCR技术比较两组移植物中提取的SVF细胞向脂肪细胞及内皮细胞诱导培养后，相关基因的上调表达情况。
　　(2)两种技术采集脂肪移植物的体内比较研究:两组脂肪移植物分别注射于裸鼠背部皮下，于移植术后第1天、第7天、第14天、第21天、第28天和第56天进行移植物标本的采集。通过称重比较两组移植物在移植术后的重量变化情况;通过HE染色及Perilipin免疫荧光染色比较两组移植物标本的形态学完整性;通过CD31免疫组化染色比较两组移植物标本中血管新生情况;通过west blot检测技术比较两组移植物移植后的凋亡。
　　2.不同纯化方式对水动力技术采集脂肪移植物存活的影响研究
　　选择健康女性志愿者的双侧髂腰部或大腿部为脂肪供区。由同一术者于双侧术区对应部位应用水动力技术采集获得水动力脂肪移植物标本，静置20分钟后排去底层水分。随机选择一侧术区采集的标本为静置组（A组）。另一侧的标本离心(1200g，3分钟)后去除脂肪层上方油脂及下方液体，为离心组（B组）。体外研究:通过HE染色比较两组标本的形态完整性;通过葡萄糖转移实验比较两组标本的活力;应用细胞计数比较两组标本中提取的SVF细胞的数量;通过流式细胞分析技术比较两组标本中脂肪组织来源干细胞的数量。体内研究:将两组移植物移植与裸鼠背部皮下，于移植术后第1天、第7天、第28天和第56天进行移植物标本的采集。通过称重比较两组标本移植体内后的重量变化情况;通过HE染色及Perilipin免疫荧光染色比较两组移植物标本的形态学完整性;通过CD31免疫组化染色比较两组标本移植后各个时间点的血管新生情况。
　　结果:1.应用水动力技术采集脂肪移植物有利于获得更好的移植后存活
　　(1)水动力技术采集的脂肪移植物（A组）比常规负压技术采集的移植物（B组）具有更多完整的脂肪细胞及更高的活力(p＜0.05)。A组移植物中提取的SVF细胞含有更高比例CD34+CD31-CD45-脂肪组织来源干细胞且体外诱导培养后检测到更高水平的血管性血友病因子(vWF)、CD31、过氧化物酶增殖物激活受体-γ(PPAR-γ)、CCAAT增强子结合蛋白α(CEBP-α)基因上调(p＜0.05)，更有利于获得好的移植后存活。
　　(2)两组移植物标本的重量均随着移植时间的延长而呈下降趋势，A组标本在移植术后第14天、21天、28天及56天的重量大于B组(p＜0.05)。A组标本在移植术后具有更好的形态学完整性，移植术后第7天至第56天，具有更多的Perilipin阳性脂肪细胞(p＜0.05);移植术后第21天至第56天，具有更高的完整脂肪细胞面积比例(p＜0.05)。A组标本比B组表现出更小的凋亡，在移植术后第7至第56天， B组标本中AnnexinⅤ的表达高于A组。A组标本中更早出现明显的血管新生现象，在移植术后第21天至56天，A组标本中血管数目多于B组(p＜0.05)。
　　2.应用离心法纯化水动力脂肪移植物能够获得更好的移植后存活
　　离心组（A组）水动力脂肪移植物标本的活力与静置组（B组）标本无明显差异(p＞0.05)。1200g离心3分钟能够有效排除脂肪移植物中的液体及油脂成分，浓聚移植物内的SVF细胞及脂肪组织来源干细胞，单位体积B组标本比A组标本提取得到更多的SVF细胞及脂肪组织来源干细胞(p＜0.05)。B组的水动力脂肪移植物在移植术后各个时间点标本的重量均大于A组(p＜0.05)，移植术后第28天至第56天，B组标本具有更好的形态学完整性及更多的新生血管形成(p＜0.05)。
　　结论:1.应用水动力技术进行脂肪移植物的采集有利于移植脂肪的存活。与常规负压技术相比，水动力技术对脂肪细胞的损伤更小，采集的水动力脂肪移植物具有更高的活力及更多的脂肪组织来源干细胞，在移植之后具有更好的重量保持情况、更佳的形态学完整性、更小的凋亡以及更多的新生血管形成。
　　2.应用离心法纯化水动力脂肪移植物能够获得更好的移植后存活。单纯静置与静置后离心（1200g3分钟）纯化的水动力脂肪移植物的活力无明显差异。1200g离心3分钟能有效的去除水动力脂肪移植物中多余的液体成分及油脂，同时增加了单位体积移植物中脂肪组织来源干细胞的数量，在移植后具有更好的重量保持情况、更佳的形态学完整性以及更多的新生血管形成。

目录

摘要

文献综述：自体脂肪移植手术中使用的脂肪采集、纯化及注射技术

前言

第一部分 水动力技术与常规负压采集技术对移植脂肪存活影响的比较研究

第一节 水动力技术与常规负压技术采集的脂肪移植物的比较研究

1 实验材料

2 主要仪器设备

3 实验方法

4 实验结果

5 讨论

6．结论

第二节 水动力技术与常规负压技术采集脂肪移植物的体内存活研究

1 实验材料

2 脂肪采集及实验用主要仪器设备

3 实验方法

4 实验结果

5 讨论

6．结论

第二部分 不同纯化方式对水动力技术采集脂肪移植物存活的影响研究

1 实验材料

2 主要仪器设备

3 实验方法

4 实验结果

5 讨论

6．结论

全文总结

参考文献

附图

缩略词表

致谢

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