BMP-2微球与骨髓间充质干细胞联合脱细胞羊膜修复兔下颌缺损的实验研究

摘要

背景:
　　骨缺损是常见的临床问题，通常由创伤、疾病或手术等原因造成。骨缺损的修复方法主要包括自体骨移植、异体骨移植和异种骨移植，但存在不同程度的骨吸收和取骨区并发症、排异及感染等问题。而组织工程骨的尚未在临床广泛应用，还处于实验阶段。上个世纪口腔科提出诱导再生技术中应用诱导成骨膜能够促进骨缺损的修复，其中的膜性材料众多，研究中也发现一些不足之处，比如材料的外露、不可降解、制造工艺复杂等等。本研究从诱导再生技术出发，提出以羊膜基质作为支架，复合BMP-2微球构建了具有缓释BMP-2功能的成骨诱导膜性材料，并探索其体外对骨髓间充质干细胞成骨作用和体内修复下颌骨缺损的可行性。羊膜基质获得和制作方便简单，而且具有许多生物特性，是良好的生物敷料和支架，在组织修复和重建方面应用广泛。将羊膜基质携载BMP-2微球提高了该成骨诱导膜性材料的诱导成骨能力，在修复下颌骨缺损乃至其他部位骨缺损都有良好的应用前景。
　　目的:
　　构建以脱细胞羊膜基质为支架，复合BMP-2微球形成新型的诱导成骨材料。通过研究其对骨髓间充质干细胞成骨能力的影响和其对颌骨缺损动物模型的修复能力，为修复下颌骨缺损乃至其他部位骨缺损探索一种新的治疗方法。
　　方法:
　　本研究首先制备人脱细胞羊膜基质，固定后行HE染色，证实细胞成分彻底去除;应用扫描电镜观察人脱细胞羊膜的结构特征;制备BMP-2缓释微球并测定其结构、载药量及缓释曲线;抽取兔股骨骨髓以全骨髓培养法分离培养兔骨髓间充质干细胞，进行成骨及成脂诱导分化及测定，并以脱细胞羊膜基质为支架进行复合培养，对其进行HE染色剂及扫描电镜检测;动物实验分为脱细胞羊膜复合BMP-2微球联合兔骨髓间充质干细胞组（实验组）与空白对照组。
　　结果:
　　采用酶消化法制备的脱细胞羊膜基质无细胞残留，且保有致密多孔三维网状结构。明胶琼脂载药微球能够有效地起到缓释药物的作用，并且微球形状均匀饱满。全骨髓培养法分离培养的兔骨髓间充质干细胞具有成骨、成脂的分化能力，并且能够在HAMM表面生长增殖。实验动物分为实验组与对照组，对实验兔下颌骨制作1cm×1cm大小骨缺损模型。实验组的兔下颌骨缺损采用BMP-2微球与BMSCs联合脱细胞羊膜的方法填充修复，通过术后影像学及组织学的检测分析比较发现，该方法能够有效地促进骨缺损的修复。
　　结论:
　　脱细胞羊膜基质具有良好的细胞相容性，对细胞的生长增殖及分化无明显抑制作用。兔BMSCs经过成骨诱导培养后表达成骨细胞表型，可作为骨组织工程的理想种子细胞之一。BMP-2微球与BMSC联合脱细胞羊膜可以有效地促进兔下颌骨缺损的修复。

目录

英文缩略词表

摘要

前言

第一部分 微球制作与检测

引言

一、材料和方法

二、结果

第二部分 脱细胞羊膜基质的制备与细胞培养

引言

一、脱细胞羊膜基质的制备与检测

二、结果

三、兔骨髓间充质干细胞的分离培养

四、结果

第三部分 兔下颌骨缺损的修复

引言

一、BMP-2微球与BMSCs联合脱细胞羊膜修复兔下颌缺损

二、结果

讨论

结论

参考文献

致谢

脱细胞羊膜基质在组织工程中的应用进展

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