四氢嘧啶对人冰冻红细胞影响的初步研究

摘要

目的:红细胞是血液中主要成分之一，具有运输氧气和二氧化碳的作用。一次性大量失血、严重贫血或严重感染的手术前等情况需要输注红细胞，因而临床上对血液的需求大。血液离体后的保存效果或时间，对临床用血及安全具有重要的作用。红细胞的冰冻保存是一种离体后有效的保存办法。目前以高浓度甘油作为冰冻红细胞的主要保护剂。高浓度甘油溶液具有很高的渗透压且对细胞无维持稳定的作用，用此甘油化细胞时，需要调节细胞的渗透压及维持细胞正常形态。研究发现，嗜盐菌和耐盐菌内的四氢嘧啶(ectoine)，可调节细菌的渗透压。本研究根据目前的研究进展，推测使用高浓度甘油对红细胞作用时，四氢嘧啶可对渗透压起调节作用。
　　研究ectoine对红细胞渗透压的影响;研究ectoine作为渗透压调节物，应用于冰冻红细胞后，对红细胞质量的影响。
　　方法:1）阐述红细胞在等渗ectoine、等渗乳酸钠、生理盐水、超纯水和等渗甘油中的吸光度动力学，研究ectoine对红细胞渗透压的影响。2）探索使用57％甘油(w/v)作为深低温保护剂时，冰冻并解冻红细胞的步骤，从而确定高浓度甘油冰冻红细胞的实验方法;使用不同浓度(1.5％、3.0％、4.5％，均为w/v)ectoine与57％甘油(w/v)联用作为实验组、国内商品化的复方甘油为对照组，冰冻红细胞，测定冰冻前后实验组和对照组细胞的回收率、变形性、渗透脆性、三磷酸腺苷(ATP)含量、果糖-6磷酸激酶(PFK)活力、丙酮酸激酶(PK)活力及乳酸脱氢酶(LDH)活力指标，初步研究ectoine与甘油联用冰冻红细胞，对红细胞质量的影响。
　　结果:红细胞在等渗ectoine、等渗乳酸钠和生理盐水中的吸光度动力学相似，得出ectoine与乳酸钠和氯化钠相似，可调节渗透压;红细胞在超纯水和等渗甘油的吸光度动力学相似，证实溶液中甘油不可维持细胞膜稳定。3.0％ectoine与甘油联用与国内商品化的复方甘油冰冻后的红细胞相比，在回收率、渗透脆性、ATP含量、PK活力及LDH活力上，差异具有统计学意义;Ectoine与甘油联用冰冻红细胞，PFK活力在冰冻前差异不具有统计学意义。
　　结论:Ectoine对红细胞的渗透压起调节的作用。在质量上，3.0％ectoine与甘油联用作为深低温保护剂冰冻红细胞，优于商品化的复方甘油的红细胞，提高冰冻红细胞的质量，也拓宽四氢嘧啶的应用范围。

目录

摘要

1．1 红细胞保存

1．1．1 红细胞低温保存

1．1．2 红细胞深低温保存

1．2 四氢嘧啶的研究

1．2．1 四氢嘧啶的简介

1．2．2 四氢嘧啶在生物和医学上的研究

1．3 课题设计

第二章 四氢嘧啶对人红细胞作用的初探及冰冻解冻红细胞步骤的确定

2．1 引言

2．2 四氢嘧啶对红细胞作用的初探

2．2．1 样品来源

2．2．2 主要仪器与试剂

2．2．3 溶液的配制

2．2．4 实验步骤

2．2．5 实验结果及分析

2．3 四氢嘧啶与高浓度甘油联合用于冰冻红细胞

2．3．1 样品来源及分组

2．3．2 主要仪器与试剂

2．3．3 冻存液的配制

2．3．4 实验方法、结果与分析

2．4 小结

第三章 四氢嘧啶对人冰冻红细胞的质量的影响

3．2 变形性

3．2．1 样品来源及分组

3．2．2 主要仪器与试剂

3．2．3 溶液的配制

3．2．4 实验步骤

3．2．5 变形性结果与分析

3．3 渗透脆性

3．3．1 样品来源及分组

3．3．2 主要仪器与试剂

3．3．3 溶液的配制

3．3．4 实验步骤

3．3．5 渗透脆性结果与分析

3．4 三磷酸腺苷(ATP)

3．4．1 样品来源及分组

3．4．2 主要仪器与试剂

3．4．3 溶液的配制

3．4．4 实验步骤

3．4．5 ATP结果与分析

3．5 磷酸果糖激酶(PFK)

3．5．1 样品来源及分组

3．5．2 主要仪器与试剂

3．5．3 溶液的配制

3．5．4 实验步骤

3．5．5 PFK结果与分析

3．6 丙酮酸激酶(PK)

3．6．1 样品来源及分组

3．6．2 主要仪器与试剂

3．6．3 溶液的配制

3．6．4 实验步骤

3．6．5 PK结果与分析

3．7 乳酸脱氢酶(LDH)

3．7．1 样品来源及分组

3．7．2 主要仪器与试剂

3．7．3 溶液的配制

3．7．4 实验步骤

3．7．5 LDH结果与分析

3．8 小结

第四章 主要结论与后续建议

4．1 主要结论

4．2 后续建议

参考文献

附录

致谢

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