两种鞘翅目昆虫细胞培养及昆虫细胞系染色体分析

摘要

昆虫细胞培养技术作为细胞工程基础之一，是现代实验生物学上极有价值的手段之一，广泛应用于生物学、医学及农业的各个领域。本文针对我国目前还没有鞘翅目昆虫细胞系建立成功的现状，利用两种鞘翅目昆虫的各种组织进行了鞘翅目昆虫细胞体外培养的尝试，为建立新的鞘翅目昆虫细胞系提供了理论基础和借鉴经验。并对十株昆虫细胞系的染色体进行了分析，为昆虫细胞培养的研究提供了重要的理论依据，充实了昆虫细胞系库的参考数据。主要试验结果如下： 1.鞘翅目昆虫细胞培养： 本研究摸索了喙尾琵琶甲的各种组织及黄粉虫脂肪体原代培养的各种条件，得出各种组织在原代培养时适宜的培养条件：(1)喙尾琵琶甲新孵幼虫培养：0.5％的洗必泰乙醇溶液浸泡处理卵5min能得到较好的消毒及孵化效果；采用组织块法处理能获得较好的效果；比较适合于在改良Grace培养基中生长。(2)喙尾琵琶甲胚胎细胞培养：较适合于在改良Grace培养基中生长。(3)喙尾琵琶甲血淋巴细胞培养：在75％酒精消毒8min且从其背血管取血能获得较好的消毒效果和较大的取血量，较适合于在Schneider培养基中生长。(4)喙尾琵琶甲精巢细胞培养：采用组织块法和胰蛋白酶消化法处理组织得到的结果区别不大；较适合于在Schneider培养基中生长。(5)喙尾琵琶甲卵巢细胞培养：采用胰蛋白酶消化法处理能获得较好的效果；细胞MGM-450、Schneider、Grace及改良Grace四种培养基生长情况差别不大。(6)黄粉虫脂肪体细胞培养：采用组织块法和胰蛋白酶消化法处理组织得到的结果区别不大；较适合于在Schneider培养基中生长。总的来说，原代培养的细胞在体外有一定的生长现象，细胞在体外最长存活20个月以上。目前仍有21株细胞在培养和观察中，其中有4株分别来源于喙尾琵琶甲精巢及黄粉虫脂肪体的细胞经过了一定次数的传代培养成为有限细胞系。 2.昆虫细胞系染色体分析： 对十株分别来源于鳞翅目和双翅目的昆虫细胞系进行了染色体分析，得出了各种细胞染色体分析所需要的秋水仙素浓度与处理时间以及低渗浓度和处理时间的范围。实验结果显示两个目细胞系染色体表现出很大的差异性，鳞翅目细胞表现为典型的鳞翅目昆虫传代细胞的核型特征：染色体数目众多，异倍化严重，染色体形态较小，多为弥散型的着丝粒的短杆状、颗粒状、点状或圆球状；而双翅目细胞也有其共同的特性：染色体形态较大，缢痕也较为明显，多为杆状的中部着丝粒染色体或亚中部着丝粒染色体，其数目较为恒定，常集中于几个数目，大多数与其来源虫种的染色体及倍性保持一致性。

目录

文摘

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第一章前言

第二章两种鞘翅目昆虫细胞培养

第三章昆虫细胞系染色体分析

第四章结论与讨论

参考文献

图 版

致谢

附录攻读硕士学位期间参加的科研项目