ECM相关基因在兔膝关节软骨细胞损伤后的表达变化

摘要

目的：检测MMP-2、MMP-3、MMP-9、TIMP-3及Col-II细胞外基质因子在兔关节软骨细胞划伤后不同时间点的表达变化。
　　方法：从成年的新西兰大白兔的膝关节股骨下端关节面分离出关节软骨组织，进行原代六孔板培养。待细胞长出基本完全融合时，将培养的细胞分成4组。分别为正常组，损伤后1、3、7天组。第1组不做任何处理，留作正常对照；第2至4组细胞使用无菌10μl枪头在六孔板中呈“＃”字划伤，在划痕过程中，力度与速度一致，其中，间距为0.5 cm。采用实时PCR检测1、3、7和0天时间点基质金属蛋白酶-2、3和9，基质金属蛋白酶抑制物-3及II型胶原相对表达水平。
　　结果：成功获取软骨，经原代培养后成功建立损伤细胞模型。MMP-2 mRNA表达水平在损伤后1，3，7天均比正常组升高，其中第7天最高(P<0.05)。MMP-3 mRNA表达水平在细胞损伤后第1，3，7天均比正常组明显下降，第7天最低(P<0.05)。 MMP-9 mRNA表达水平在损伤后第1，3，7天均比正常组升高，第3天最高，随之开始下降(P<0.05)。TIMP-3 mRNA表达水平在损伤后第1，3，7天均比正常组下降，第7天水平最低(P<0.05)。Col-II mRNA表达水平在损伤后第1，3，7天均比正常组升高，第1天达到最高(P<0.05)。
　　结论：ECM相关基因在细胞损伤后的不同时间点存在不同表达行为，这可为调节细胞外基质基因选择合适的靶基因与时间窗，促进受损的关节软骨愈合奠定实验基础。

目录

封面

声明

目录

中文摘要

英文摘要

前言

材料与方法

一、实验材料

1. 实验动物

2. 主要试剂及耗材

3. 主要仪器设备

二、实验方法

1.软骨细胞分离、培养及生物学鉴定

2.关节软骨细胞体外划伤模型的建立

3.荧光定量PCR检测关节软骨细胞损伤后MMP-2、-3 和-9、TIMP-3及Col-II因子mRNA的表达

结果

一、软骨细胞获取、分离、及培养

1. 剥离兔膝关节透明软骨

2. 软骨细胞原代培养和传代培养生长情况

二、制备兔膝关节软骨细胞划伤模型

三、细胞外基质因子mRNA在不同时间点表达

1. RNA质量检测

2. 内参GAPDH普通PCR结果

3. MMP-2、-3和-9、TIMP-3及Col-II基因不同时间点普通PCR产物电泳结果

4．实时荧光定量PCR结果

讨论

结论

参考文献

致谢

附录

附录A中英文术语缩略语对照表

附录B主要试剂配制方法及实验路线图

附录C个人简历

综述:MMP家族对软骨损伤后的修复作用