五步蛇蛇毒分离纯化中纤溶酶和类凝血酶的研究

摘要

为充分利用蛇毒，提高蛇毒制剂的产量，降低生产成本，使其更广泛的应用与临床治疗，本文对五步蛇蛇毒分离纯化中纤溶酶和类凝血酶进行了研究。文章将五步蛇蛇毒通过SephadexG-75分子筛层析后，纤溶酶活性组分与类凝血酶活性组分形成了初步分离。通过DEAE阴离子交换层析后，纤溶酶活性和类凝血酶活性组分得到了进一步的分离纯化。对层析后的酶活组分进行纯度检测，C18HPLC图谱上均显示单一峰，SDS-PAGE图谱上均显示单一条带，纤溶酶分子量为24.1kD，类凝血酶分子量为14.4kD。研究发现：两种酶比活力较高，更重要的是两种酶的总活力回收率都有很大提高，其中纤溶酶的活力回收率达23.3﹪，类凝血酶活力回收率达34.5﹪。

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第一章文献综述

1.1蛇毒简介

1.2蛇毒的主要组成及生理活性

1.2.1神经毒性多肽

1.2.2膜活性多肽

1.2.3酶类

1.2.4乙酰胆碱

1.2.5神经生长因子

1.3对凝血系统作用的有关成分

1.3.1出血毒素

1.3.2舒缓激肽释放酶和舒缓激肽增强肽

1.3.3对凝血系统作用的有关成分

1.4蛇毒的医学用途

1.4.1镇痛作用

1.4.2抗癌

1.4.3抗血栓作用

1.4.4止血作用

1.4.5抗蛇毒血清制备

1.4.6其它临床应用

1.5蛇毒的研究进展

1.5.1蛇毒的一般进展

1.5.2五步蛇蛇毒的研究

1.6本课题的目的意义

第二章实验试剂及设备

2.1实验试剂

2.1.1原料

2.1.2实验试剂

2.2实验设备

第三章实验研究

3.1纤溶酶活性测定方法

3.2类凝血酶活性测定方法

3.3蛋白质浓度检测

3.4蛇毒纯化方法

3.4.1蛋白纯化系统

3.4.2 Sephadex G-75分子筛层析

3.4.3 DEAE离子交换层析

3.5纯度分析

3.5.1 C18高效液相色谱检测

3.5.2 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳

3.6酶谱分析法

3.6.1非变性SDS-PAGE

3.6.2转移电泳酶谱

3.7实验结果与分析

3.7.1尿激酶标准曲线

3.7.2凝血酶标准曲线

3.7.3五步蛇蛇毒Sephadex G-75分子筛层析

3.7.4 五步蛇蛇毒离子交换层析

3.7.5活性组分的纯度检测及分子量标定

3.7.6五步蛇蛇毒酶谱分析

3.7.7步蛇蛇毒收率分析

第四章结论

参考文献

附录1

附表2

致谢

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