利用生物传感器检测玉米褪绿斑驳病毒和黄瓜花叶病毒的研究

摘要

自从我国加入WTO后，我国对外开放程度不断扩大，全球化贸易不断发展，通过口岸进入境内的境外植物病毒也随之增多。玉米褪绿斑驳病毒及黄瓜花叶病毒等检疫性有害病毒传入我国的风险增加，而黄瓜花叶病毒又具有广泛的寄主，对于其的检测更加困难，相关检验检疫部门面临着严峻的考验。因此研究出一种简便快捷地检测出入境玉米褪绿斑驳病毒和黄瓜花叶病毒的方法非常重要。本课题研究了利用石英晶体微天平(QCM）对玉米褪绿斑驳病毒的检测，同时也应用表面等离子体共振仪(SPR)对检测黄瓜花叶病毒进行了研究。
　　 本课题的研究内容包括两部分:
　　 (1)首先研究了利用石英晶体微天平检测玉米褪绿斑驳病毒。采用11-MUA单独修饰QCM金片与3-MPA和11-MUA共修饰QCM金片修饰方法，两种修饰方法所修饰的QCM金片对玉米褪绿斑驳病毒进行灵敏度、特异性和实际样品检测的研究。然后通过比较两种QCM金片修饰方法，确立了QCM金片修饰的最佳条件:使用体积比为10∶1的3-MPA和11-MUA混合液修饰QCM金片。使用该方法修饰的QCM金片检测MCMV灵敏度能够达到250ng/mL，建立的检测方法具有较好的特异性，在实际样品中能够检测出感染MCMV玉米样品。该方法具有良好重复性，且能够得到金片表面厚度的变化，通过D-F曲线斜率变化能够了解实验过程中抗原抗体结合紧密程度及抗原结构的变化。
　　 (2)研究了表面等离子体共振仪检测黄瓜花叶病毒的方法。采用了11-MUA单独修饰SPR金片与11-MUO和11-MUA共修饰SPR金片的方法，对两种方法修饰的SPR金片进行了检测灵敏度、特异性和实际样品的研究。通过两种修饰方法的对比，确立了最佳修饰SPR金片的条件:使用浓度比为10∶1的11-MUO和11-MUA共同修饰SPR金片，检测灵敏度为1ng/mL。进行的特异性实验表明建立的该检测方法具有良好的特异性，同时在实际样品中能够检测出感染CMV植株。

目录

声明

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摘要

符号说明

第一章 绪论

1．1 引言

1．2 石英晶体微天平原理及其应用

1．2．1 石英晶体微天平原理

1．2．2 石英晶体微天平的应用

1．3 表面等离子共振仪原理及其应用

1．3．1 表面等离子体共振仪原理

1．3．2 SPR生物传惑器的应用

1．4 生物传感器芯片表面修饰方法

1．5 研究内容和拟解决的关键问题

1．5．1 研究内容

1．5．2 拟解决的关键性问题

第二章 利用石英晶体微天平传感器检测玉米褪绿斑驳病毒的研究

2．1 实验材料

2．1．1 化学试剂及材料

2．1．2 植物材料

2．1．3 仪器及耗材

2．2 实验方法

2．2．1 配制溶液的方法

2．2．2 TAS-ELISA验证实验

2．2．3 QCM金片清洗过程

2．2．4 QCM金片表面形成自组装单分子层的过程

2．2．5 QCM检测纯病毒蛋白的过程

2．2．6 QCM检测植物材料过程

2．3 结果与讨论

2．3．1 TAS-ELISA实验结果

2．3．2 11-MUA修饰QCM金片

2．3．3 3-MPA和11-MUA共修饰QCM金片

2．3．4 两种修饰方法的比较

2．3．5 3-MPA和11-MUA共修饰的QCM金片表面的研究

2．4 本章小结

第三章 利用表面等离子共振传感器检测黄瓜花叶病毒的研究

3．1 实验材料

3．1．1 化学试剂及其他材料

3．1．2 植物材料

3．1．3 仪器及耗材

3．2 实验方法

3．2．1 配制溶液的方法

3．2．2 TAS-ELISA验证实验

3．2．3 SPR金片预处理

3．2．4 11-MUA修饰SPR金片

3．2．5 11-MUO和11-MUA共修饰SPR金片

3．2．6 SPR金片修饰单抗过程

3．2．7 SPR检测待测样品

3．3 结果与分析

3．3．1 TAS-ELISA实验结果

3．3．2 11-MUA修饰SPR金片检测CMV的研究

3．3．3 11-MUO和11-MUA共修饰SPR金片检测CMV的研究

3．3．4 两种修饰方法的比较

3．4 结论

第四章 结论

4．1 结论

4．2 创新点

4．3 展望

参考文献

致谢

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