基于核酸适配体的侧流层析试纸条法快速检测氯霉素残留

摘要

氯霉素是一种广泛使用的抑菌性光谱抗生素，普遍添加于动物饲料和药物中，近年来氯霉素滥用现象愈加普遍，它对人体的一些副作用也凸显出来，所以氯霉素的追踪与检测变得非常重要，尤其是简单、快速、成本低的实时检测方法具有更加广泛的研究前景，目前也急需开发特异性强、灵敏度高的新型检测方法用于氯霉素残留的初步快速筛查。
　　侧流免疫试纸条(LFAS)是基于色谱的一种生物传感器，近年来，试纸条生物传感器由于其可移动性、快速性，成本低和易于操作而引起了研究者广泛的兴趣。目前也逐渐开发了一系列基于抗体的试纸条传感器用于氯霉素的定性或者定量分析。但因为抗体是在体内合成，非免疫原性和毒性的靶标无法产生相应的抗体，所以抗体并不是普遍适用的。近年来，一种新的识别分子—适配体被广泛用于生物识别。作为一种较短的单链DNA或RNA（通常为DNA），这些高度特异性的分子会与靶标分析物形成特殊的三维构象。
　　在此，基于竞争性测定开发了一种新的敏感和特异性试纸条传感器，使可视化的纳米金颗粒的着色剂来检测氯霉素。通过肉眼肉眼检查红色条带并通过带状读数仪进行扫描以实现精确的定量检测。文章还对金纳米粒子的粒径大小，适配体的数量，链霉亲和素的种类和pH，读取时间和封闭方式、硝化纤维膜的种类等进行了优化。同时进行氯霉素和金标适配体的预孵育过程以进一步提高灵敏度，得出最终的传感器检测限(LOD)为0.5ppm，读数仪的检测限LOD分别为63.4ppb。此外，开发出的试纸条传感器对于检测氯霉素具有高灵敏度，并且对氯霉素和氯霉素的类似物（氟苯尼考和甲砜霉素）具有高度特异性。最后，文章还对实际样品市政用水进行两氯霉素的检测，测得的加标回收率为85.7％-110.68％，说明样品的基质影响较小，该试纸条的传感器抗干扰能力强，准确性高，可对氯霉素特异性识别。此基于纳米金的适配子传感器检测氯霉素时不需要任何复杂的设备，另外，对于其他小分子微污染物检测，可以进一步参考使用次核酸适配体对用于生物传感器开发的设计。

目录

声明

摘要

符号和缩略词说明

第一章 绪论

1．1 氯霉素

1．1．1 氯霉素概论

1．1．2 氯霉素的检测方法

1．2 试纸条检测方法概论

1．2．1 试纸条的组成

1．2．2 试纸条传感器的反应模式

1．2．3 构成试纸条传感器的重要基础

1．3 立项背景与研究意义

1．4 本论文的主要研究内容

第二章 纳米金的制备及各反应元件的结合

2．1 纳米金的制备

2．1．1 实验材料

2．1．2 实验目的和方法

2．1．3 实验结果

2．1．4 小结

2．2 纳米金和适配体的结合

2．2．1 适配体的活化

2．2．2 纳米金溶液pH调节

2．2．3 金标适配体的结合

2．2．4 适配体对纳米金的保护

2．2．5 实验结果与分析

2．2．6 金标适配体的表征

2．3 本章小结

第三章 侧流层析试纸条传感器的设计和应用

3．1 实验材料

3．1．1 实验试剂及材料

3．1．2 实验设备

3．2 试纸条实验

3．2．1．非特异性吸附

3．2．2 优化实验因素

3．2．3 标准曲线

3．2．4 试纸条检测

3．2．5 实际样品的检测

3．2．6 试纸条的特异性

3．3 本章小结

第四章 结论、创新点与展望

4．1 本论文的结论

4．2 本论文的创新点

4．3 展望

参考文献

致谢

研究成果及发表的学术论文

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