MiR-223在CVB3诱导的病毒性心肌炎小鼠心肌细胞焦亡中的作用

摘要

目的：　　1.通过构建CVB3诱导的病毒性心肌炎小鼠模型，检测小鼠心肌中细胞焦亡相关分子，了解病毒性心肌炎小鼠心肌中细胞焦亡分子水平；　　2.通过检测CVB3诱导的病毒性心肌炎小鼠心肌中miR-223水平，初步探讨miR-223在CVB3诱导的病毒性心肌炎小鼠心肌细胞焦亡中的作用。　　方法：　　1.CVB3病毒性心肌炎小鼠模型的建立　　1.1选用BALB/c小鼠30只，随机分为对照组（Normal组）和病毒性心肌炎组（CVB3组），每组15只，CVB3组小鼠腹腔注射0.1ml含105TCID50的CVB3，对照组腹腔注射等量的PBS。每天观察小鼠一般情况，有无出现卷缩、活动减少、扎堆，对刺激不敏感等情况。连续观察7天，记录小鼠体重变化以及小鼠生存状况。　　1.2小鼠腹腔注射CVB3后的第7天，通过眼内眦采血，采用ELISA法检测各组小鼠血清心肌肌钙蛋白I（cardiactroponin,cTnI）水平。　　1.3小鼠腹腔注射CVB3后的第7天，处死小鼠提取心肌组织标本，常规4%多聚甲醛固定、脱水、石蜡包埋后切片，进行HE染色，观察各组心肌组织病理变化情况。通过对小鼠体重变化，生存率情况，小鼠血清cTnI水平以及心肌组织病理情况来判断CVB3诱导的病毒性心肌炎小鼠模型是否构建成功。　　2.CVB3病毒性心肌炎小鼠的细胞焦亡相关分子检测　　小鼠腹腔注射CVB3后的第7天，通过眼内眦采血用于ELISA检测，取液氮保存的心肌组织用于qRT-PCR，Westernblot检测。　　2.1小鼠腹腔注射CVB3后的第7天，通过qRT-PCR方法检测对照组与CVB3组小鼠心肌中NLRP3及caspase-1mRNA的表达水平。　　2.2小鼠腹腔注射CVB3后的第7天，通过Westernblot检测对照组与CVB3组小鼠心肌中caspase-1/pro-caspase-1的比值的变化。　　2.3小鼠腹腔注射CVB3后的第7天，通过ELISA检测对照组与CVB3组小鼠血清IL-1β水平的变化。　　3.CVB3病毒性心肌炎小鼠的miR-223检测　　小鼠腹腔注射CVB3后的第7天，通过qRT-PCR方法检测对照组与CVB3组小鼠心肌中miR-223表达水平。　　结果：　　1.CVB3病毒性心肌炎小鼠模型的建立　　1.1CVB3组小鼠第3天开始出现卷缩、活动减少、扎堆，对刺激不敏感等症状；对照组小鼠体重自第1天开始起逐渐增加，CVB3组小鼠体重从第3天开始下降，并一直持续到第7天。　　1.2小鼠感染CVB3后7天内的生存情况：对照组小鼠生存率100%，CVB3组小鼠从第2天开始死亡，到第7天生存率为47%。　　1.3通过ELISA检测各组小鼠血清cTnI水平结果显示，CVB3组小鼠血清中cTnI的水平较对照组显著增加，差异具有统计学意义（P＜0.05）。　　1.4HE染色镜下显示：CVB3组小鼠心肌纤维排列紊乱，心肌细胞水肿，心肌间质中有炎性细胞的浸润。对照组小鼠心肌细胞排列规则，无炎性细胞浸润。　　2.CVB3病毒性心肌炎小鼠的细胞焦亡相关分子检测结果　　2.1各组小鼠心肌中NLRP3及caspase-1mRNA表达水平：CVB3组小鼠心肌中NLRP3及caspase-1mRNA表达量较对照组显著增加，差异具有统计学意义（P＜0.05）。　　2.2各组小鼠心肌中caspase-1/pro-caspase-1的比值：CVB3组小鼠心肌中caspase-1/pro-caspase-1的比值较对照组明显增加，差异具有统计学意义（P＜0.05）。　　2.3各组小鼠血清IL-1β水平：CVB3组小鼠血清中IL-1β的水平较对照组显著增加，差异具有统计学意义（P＜0.05）。　　3.CVB3病毒性心肌炎小鼠的miR-223检测结果　　通过qRT-PCR检测各组小鼠心肌的miR-223表达水平，CVB3组小鼠心肌中miR-223表达量较对照组明显降低，差异具有统计学意义（P＜0.05）。　　结论：　　1.通过对BALB/c小鼠腹腔注射CVB3，成功构建CVB3病毒性心肌炎小鼠模型；　　2.CVB3病毒性心肌炎小鼠心肌中细胞焦亡相关分子水平升高；　　3.CVB3病毒性心肌炎小鼠心肌中miR-223水平降低，miR-223可能参与CVB3病毒性心肌炎小鼠心肌中细胞焦亡的调控。

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