创伤性颅脑损伤合并海水淹溺大鼠脑组织神经炎性反应的研究

摘要

第一部分：创伤性颅脑损伤合并海水淹溺大鼠脑组织TNF-α、IL-8的表达
　　【目的】：
　　探究创伤性颅脑损伤合并海水淹溺大鼠脑组织TNF-α、IL-8蛋白的表达改变及其意义。
　　【材料和方法】：
　　选取雄性健康SD大鼠84只，按随机数字表法分为3组：假手术组（n=8）、创伤性颅脑损伤组（n=38）、创伤性颅脑损伤合并海水淹溺组（n=38）。观察大鼠建模后一般情况、脑组织及肺组织形态学改变；HE染色，观察大鼠脑组织及肺组织病理改变；ELISA法检测大鼠脑组织TNF-α、IL-8蛋白的含量。
　　【结果】：
　　1.创伤性颅脑损伤合并海水淹溺大鼠脑组织及肺组织镜下改变：光镜下可见该复合损伤大鼠脑组织神经元细胞肿皱缩、变性，细胞周围间隙疏松，神经元细胞排列紊乱，双侧顶叶皮质内可见点状出血；肺组织病灶区肺泡内大量红细胞渗出，肺泡壁断裂，肺间质血管扩张，红细胞外渗，肺间质可见炎性细胞浸润。
　　2.创伤性颅脑损伤合并海水淹溺大鼠脑组织TNF-α蛋白的表达显著增高。与假手术组相比，创伤性颅脑损伤组、创伤性颅脑损伤合并海水淹溺组大鼠造模后TNF-α蛋白的表达均呈单峰增长，峰值出现于伤后12h，组间差异具有统计学意义（P<0.05）；与创伤性颅脑损伤组相比，创伤性颅脑损伤合并海水淹溺组大鼠造模后3h、6h、12h、24h、72h、168h各时间点TNF-α蛋白的表达量也显著增加，差异具有统计学意义（P<0.05）。
　　3.创伤性颅脑损伤合并海水淹溺大鼠脑组织IL-8蛋白的表达显著增高。与假手术组相比，创伤性颅脑损伤组大鼠造模后IL-8蛋白的表达量呈上升趋势，峰值出现于伤后12h，组间差异具有统计学意义（P<0.05）；与创伤性颅脑损伤组相比，创伤性颅脑损伤合并海水淹溺组大鼠造模后3h、6h、12h、24h、72h、168h各时间点IL-8蛋白的表达量显著增加，差异具有统计学意义（P<0.05）。
　　【结论】：
　　海水淹溺可以促进创伤性颅脑损伤大鼠脑组织TNF-α、IL-8蛋白的表达，提示神经炎性反应在该复合模型大鼠的病理生理改变中发挥作用。
　　第二部分：TLR4/NF-kB信号通路在创伤性颅脑损伤合并海水淹溺大鼠神经损伤中的作用
　　【目的】：
　　探究TLR4/NF-kB信号通路所介导的神经炎性反应在创伤性颅脑损伤合并海水淹溺大鼠神经功能损伤中的作用。
　　【材料和方法】：
　　选取雄性健康SD大鼠90只，按随机数字表法分为3组：假手术组（n=14）、创伤性颅脑损伤组（n=38）及创伤性颅脑损伤合并海水淹溺组（n=38）。于建模后3h、6h、12h、24h、72h、168h各时间点，参照改良神经功能缺损评分对实验大鼠进行评分；免疫组织化学染色，检测TLR4、NF-kB（p65）在实验大鼠脑组织的表达；RT-PCR检测大鼠脑组织海马区TLR4、NF-kB（p65）mRNA的水平。
　　【结果】：
　　1.创伤性颅脑损伤合并海水淹溺大鼠改良神经功能缺损评分明显增高。与假手术组相比，创伤性颅脑损伤组大鼠造模后3h即出现神经功能缺损评分明显增加（P<0.05），随时间延长，mNSS评分逐渐下降，同组不同时间点的神经功能缺损评分存在显著差异（P<0.05）。与单纯创伤性颅脑损伤组相比，创伤性颅脑损伤合并海水淹溺组大鼠造模后3h、6h、12h、24h、72h各时间点的神经功能缺损评分也显著增高（P<0.05）。
　　2.创伤性颅脑损伤合并海水淹溺性肺损伤大鼠脑组织中TLR4、NF-kB（p65）阳性细胞的表达显著增加。与假手术组相比，创伤性颅脑损伤组、创伤性颅脑损伤合并海水淹溺组大鼠脑组织双侧顶叶皮质区TLR4、NF-kB（p65）阳性细胞数明显增加。创伤性颅脑损伤合并海水淹溺组与单纯创伤性颅脑损伤组相比，伤后24h脑组织TLR4、NF-kB（p65）阳性细胞数明显增加。
　　3.创伤性颅脑损伤合并海水淹溺性肺损伤大鼠造模后3h、6h、12h、24h、72h、168h各时间点的脑组织TLR4、NF-kB（p65）mRNA的表达水平明显高于假手术组和创伤性颅脑损伤组。与假手术组相比，创伤性颅脑损伤组、创伤性颅脑损伤合并海水淹溺组大鼠脑组织TLR4、NF-kB（p65）mRNA的相对表达量均在造模后3h即出现显著增高，24h达到高峰，同组内不同时间点的差异具有统计学意义（P<0.05）；与创伤性颅脑损伤组，创伤性颅脑损伤合并海水淹溺组大鼠脑组织TLR4、NF-kB（p65）mRNA表达的峰值明显相对提前，3h、6h、12h、24h、72h、168h各时间点的组间差异也具有统计学意义（P<0.05）。
　　【结论】：
　　海水淹溺性肺损伤可以促进TLR4/NF-KB信号通路所介导的神经炎性反应，在创伤性颅脑损伤大鼠的神经功能缺损中起重要作用。

目录

声明

英文缩略表

前言

第一部分 创伤性颅脑损伤合并海水淹溺大鼠脑组织TNF-α、IL-8的表达

材料与方法

1研究对象

2实验方法

3 统计学处理

结果

1 造模过程中大鼠的一般情况

2 大鼠脑组织、肺组织形态学改变

3 大鼠脑组织、肺组织HE染色

5 大鼠脑组织TNF-α的表达

6. 大鼠脑组织IL-8的表达

讨论

１复合损伤大鼠脑组织及肺组织均出现相应病理改变

２创伤性颅脑损伤合并海水淹溺大鼠脑组织TNF-α呈单峰增长

3 海水淹溺促进创伤性颅脑损伤大鼠脑组织IL-8的释放

结论

第二部分 TLR4/NF-kB信号通路在创伤性颅脑损伤合并海水淹溺大鼠神经损伤中的作用

材料与方法

1 研究对象

2 实验方法

3 统计学处理

结果

1 大鼠伤后神经功能缺损评分的改变

2 免疫组化检测TLR4、NF-kB（p65）阳性细胞表达

3 RT-PCR检测TLR、NF-kB(p65)mRNA的表达

讨论

1 创伤性颅脑损伤合并海水淹溺大鼠早期mNSS评分显著增高

3 创伤性颅脑损伤合并海水淹溺大鼠脑组织NF-kB（p65）mRNA的表达增加

结论

本研究的创新点

本研究的不足之处

参考文献

致谢

综述:创伤性颅脑损伤继发凝血功能异常的发生机制