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目 录
缩略语表
1前言
1.1 RNA干扰（RNAi）简介
1.1.1 RNAi的发现历史
1.1.2 RNAi的作用机制和特点
1.2 RNAi技术在昆虫学研究中的应用现状
1.3 外源dsRNA进入昆虫的途径与方法
1.3.1 显微注射法
1.3.2 浸泡法
1.3.3 饲喂法
1.4 RNAi在害虫防治中的研究进展
1.4.1 RNAi技术在杀虫剂中的研究进展
1.4.2 基于RNAi技术的抗虫转基因植物研究进展
1.5 基于RNAi技术的转基因植物对非靶标生物环境安全性评价
1.5.1 基于RNAi技术的转基因植物安全评价方法
1.6 青翅蚁形隐翅甲
1.7 昆虫V-ATPase 简介
17.1 V-ATPase的结构和功能
17.2 V-ATPase与害虫防治
1.8 本研究的目的意义及创新点
1.8.1本研究的目的意义
1.8.2本研究的创新点
2 材料与方法
2.1 供试仪器、设备
2.2 供试试剂、耗材、试剂盒
2.2.1试剂、耗材
2.2.2试剂盒
2.3供试昆虫
2.4 Total RNA的提取
2.5青翅蚁形隐翅甲中肠mRNA转录组测序
2.5.1 测序样品准备
2.5.2测序文库构建
2.6 Complementary DNA（cDNA）合成
2.7 荧光定量PCR（qPCR）
2.8目的基因的克隆
2.9目的片段的测序及质粒抽取
2.10 dsRNA模板制备及纯化
2.11 dsRNA合成及纯化
2.12生测实验中青翅蚁形隐翅甲幼虫饲养装置
2.13基于dsRNA/CS纳米微粒喂食的青翅蚁形隐翅甲幼虫RNAi技术体系的建立
2.13.1 dsRNA/CS纳米微粒制备
2.13.2纳米微粒形态学观察及粒径测定
2.13.3 纳米微粒包封率的测定
2.13.4 纳米微粒结合性测定
2.13.5 纳米微粒释放率测定
2.13.6 用壳聚糖包裹dsRNA，添加到青翅蚁形隐翅甲人工饲料中饲喂幼虫，建立RNAi技术体系
2.14 未用壳聚糖包裹的dsRNA直接添加到饲料中，喂食的青翅蚁形隐翅甲幼虫，建立RNAi体系
2.14.1含dsRNA的人工饲料的配制
2.14.2饲料中dsRNA的稳定性及完整性的检测
2.14.3人工饲料中dsRNA的生物活性检测
2.14.4未用壳聚糖包裹的dsRNA，添加到人工饲料中青翅蚁形隐翅甲幼虫
2.15 数据处理
3 结果与分析
3.1 青翅蚁形隐翅甲中肠转录组分析
3.1.1转录组拼接与测序
3.1.2转录组注释与分析
3.2青翅蚁形隐翅甲V-ATPase-A序列分析
3.3 dsPfV-ATPase-A和dsGFP的合成及纯化
3.4饲喂幼虫装置可行性验证
3.5 将dsRNA用壳聚糖包裹后，加入人工饲料饲喂青翅蚁形隐翅甲，建立基于饲喂的RNAi体系
3.5.1纳米微粒形态学观察及粒径测定
3.5.2纳米微粒包封率测定
3.5.3纳米微粒结合性测定
3.5.4纳米微粒释放率测定
3.5.5 dsRNA/CS纳米微粒加入饲料后，喂食青翅蚁形隐翅甲幼虫，幼虫体内PfV-ATPase-A表达量
3.6 将dsRNA直接加入人工饲料饲喂青翅蚁形隐翅甲，建立基于饲喂的RNAi体系
3.6.1未用纳米颗粒包裹的dsRNA，在饲料中的稳定性及完整性
3.6.2加入人工饲料中dsRNA的生物活性
3.6.3将dsRNA直接添加到饲料中，喂食青翅蚁形隐翅甲幼虫，对靶标基因的干扰效率
4讨论与总结
4.1两种饲喂法RNAi效果比较
4.2 基于喂食的青翅蚁型隐翅甲RNAi技术建立
4.3小结与展望
参考文献
致谢
华中农业大学;
