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前言
缩略词表
第1章 绪论
1.1 人肠道病毒EV-D68概述
1.1.1 EV-D68的简介
1.1.2 EV-D68生物学特征
1.1.3 EV-D68的诊断、治疗及预防
1.1.4 EV-D68的流行病学特征及现状
1.2 DNA损伤应答
1.2.1. DNA损伤应答概念
1.2.2 DNA损伤应答相关蛋白
1.2.3病毒感染和宿主细胞DNA损伤应答关系
1.3 活性氧(ROS)简介
1.3.1ROS的概念及产生机制
1.3.2 ROS诱导DNA损伤的研究进展
1.4 天然化合物抗病毒机制及其研究进展
1.4.1天然化合物抗病毒机制
1.4.2天然化合物抗病毒研究进展
第2章 材料和方法
2.1 实验材料,仪器和方法
2.1.1细胞株和病毒
2.1.2药物配制方法及处理过程
2.1.3主要实验仪器
2.1.4主要实验试剂
2.1.5主要溶液配置
2.1.6引物
2.1.7主要抗体
2.2实验方法
2.2.1实验设计及分组
2.2.3细胞计数
2.2.4病毒扩增及滴度测定
2.2.5细胞形态学和核染色
2.2.6流式细胞术检测细胞周期
2.2.7凝胶电泳和免疫印迹
2.2.8实时定量RT-qPCR
2.2.10 2’,7’-二氯荧光素二乙酸酯(DCF-DA)染色进行流式细胞术检测
2.2.11 CCK8
2.2.12彗星电泳法
2.2.13统计分析
第3章 结果与分析
3.1 EV-D68病毒诱导DNA损伤
3.1.1EV-D68病毒诱导RD细胞形态学病变效应
3.1.2 EV-D68病毒感染RD细胞抑制细胞增殖能力
3.1.3 EV-D68病毒诱导RD细胞于G0/G1期阻滞
3.1.4 EV-D68病毒感染RD细胞引起γ-H2AX蛋白上调
3.1.5 EV-D68病毒感染RD细胞产生拖尾现象
3.2 EV-D68病毒感染RD细胞激活ATM和DNA-PK通路
3.2.1 ATR、ATM和DNA-PK抑制剂处理RD细胞对EV-D68病毒的影响
3.2.2 siATR、siATM和siDNA-PK处理RD细胞对EV-D68病毒的影响
3.3 ATM和DNA-PK抑制剂对EV-D68病毒诱导RD细胞病变具有保护作用
3.3.1 ATM和DNA-PK抑制剂对EV-D68病毒诱导细胞形态学变化的影响
3.3.2 ATM和 DNA-PK抑制剂对EV-D68病毒诱导RD细胞DNA损伤的影响
3.3.3 ATM和DNA-PK抑制剂对EV-D68病毒抑制细胞增殖能力的影响
3.4 活性氧清除剂NAC对EV-D68病毒产生的影响
3.5 天然化合物对EV-D68病毒诱导RD细胞DNA损伤的影响
3.5.1天然化合物丹参酮II-A抑制病毒产生,降低γ-H2AX蛋白水平
3.5.2天然化合物白藜芦醇抑制病毒产生,降低γ-H2AX蛋白水平
3.5.3天然化合物水飞蓟宾抑制病毒产生,降低γ-H2AX水平
3.5.4芦丁、槲皮素、香兰素和齐墩果酸对EV-D68病毒产生的影响
3.6天然化合物对ATR、ATM和DNA-PK激活剂诱导RD细胞DNA损伤的影响
3.6.1筛选ATR、ATM和DNA-PK激活剂最适浓度
3.6.2天然化合物丹参酮II-A通过ATM途径抑制γ-H2AX蛋白的上调
3.6.2天然化合物白藜芦醇通过ATM和DNA-PK途径抑制γ-H2AX蛋白的上调
3.6.3天然化合物水飞蓟宾通过ATM和DNA-PK途径抑制γ-H2AX蛋白的上调
3.6.4天然化合物芦丁和槲皮素通过ATR途径抑制γ-H2AX蛋白的上调
第4章 讨论
第5章 结论
第6章 创新点
参考文献
作者简介及硕士期间取得的成果
致谢
吉林大学;