产酶溶杆菌双组份系统PilS--PilR调控抗菌物质HSAF生物合成的机制研究

目录

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摘要

第一章文献综述

1产酶溶杆菌简介

1．1产酶溶杆菌的分类及生物学特征

1．2产酶溶杆菌的生防机制

2环二鸟苷酸c-di-GMP简介

2．2c-di-GMP的合成与代谢

3双组份系统的简介

3．1双组份系统的组成

3．2双组份系统转导对生物学活性的调控作用

4本文的研究目的及意义

第二章产酶溶杆菌中受PilS-PilR直接调控的c-di-GMP代谢酶基因的鉴定及其功能与机制研究

1实验材料

1．1菌株、质粒

1．2引物设计

1．3培养基配制、培养条件

2实验方法

2．1DNA操作方法和体系

2．2连接的产物热转化大肠杆菌DH50t

2．3质粒的提取与酶切验证

2．4细菌单杂交实验

2．5电转感受态的制备及突变体的筛选(以产酶溶杆菌OH11为例)

2．6HSAF的提取及HPLC检测

2．7实时荧光定量PCR(qPCR)

2．8逆转录PCR(RT-PCR)

3结果分析

3．1产酶溶杆菌双组份系统PilS／PilR通过调控c-di-GMP的含量来控制HSAF的生物合成

3．2在pilR突变体中敲除lchD后HSAF产量上升

3．3验证LchD通过调控c-di-GMP影响HSAF产量

3．4PilR通过直接结合在lchD的启动子区来调控HSAF的生物合成

3．5PilS与LchD互作影响HSAF产量

4小结与讨论

第三章产酶溶杆菌中PilS-PilR介导的磷酸化过程对其调控HSAF合成及其细胞定位的功能研究

1试验材料

1．1菌株、质粒

1．2引物设计

1．3培养基配制、培养条件

1．4酶、抗生素、试剂盒和化学试剂

2实验方法

2．1DNA操作方法及体系

2．2转化连接产物

2．3提质粒与酶切验证

2．5细菌双杂交系统筛选

2．6氨基酸定点突变及基因截断

2．7His-tag蛋白表达及纯化

2．8凝胶阻滞电泳EMSA

3结果分析

3．1PilR-PilS的磷酸化与去磷酸化对其行使功能具有重要作用

4小结与讨论

参考文献

全文总结

攻读学位期间发表的学术论文

致谢