肝脏泡型包虫病患者外周血中调节性T细胞及IL-35表达水平的研究

摘要

目的：肝脏泡型包虫病(Hepatic alveolar echinococcosis，HAE)是一种由泡状棘球蚴(Echinococcus alveolaris，Ea)感染导致的人兽共患的寄生虫病，主要流行于我国西部牧区。泡状棘球蚴感染人体后能够诱导机体免疫调节系统，促进人体对其产生免疫耐受以利于虫体在人体内长期寄生。机体被诱导产生免疫耐受的机制是由辅助性T细胞(helper T cells，Th)和调节性T细胞(regulatory T cells，Treg)等多种效应细胞共同参与的复杂免疫调控系统，在宿主体内分别形成促进寄生虫死亡的炎症反应和促进宿主对寄生虫形成免疫耐受的免疫抑制的作用，两股力量互相牵制权衡，最终导致了肝脏泡型包虫病的慢性感染病程。这一机制中，Th17/Treg平衡在免疫反应的调节中具有重要的作用，Th17细胞主要以促进棘球蚴死亡的炎性反应为主，而Treg细胞能通过分泌相关具有抑制作用的细胞因子使机体免疫处于抑制状态。尤其白介素-35(Interleukin35，IL-35)是由Treg细胞分泌的一种新型细胞因子，它对Treg细胞的功能具有重要的调节作用，目前在关于泡型包虫病的研究领域还未见报道。　　本次研究通过对临床肝脏泡型包虫病患者和健康志愿者的外周血中的CD4+CD25+CD127low Treg细胞和IL-35的表达水平进行检测，初步探讨CD4+CD25+CD127low Treg细胞和相关细胞因子IL-35对于泡型包虫病发生发展过程的表达水平和意义。　　方法：在2017年01月-2017年09月期间于四川省人民医院收治的17例肝脏泡型包虫病患者和17例健康志愿者被纳入到本研究中。将其分为肝脏泡型包虫病患者组和健康志愿者对照组两组。采集受试者外周血检测CD4+CD25+CD127low Treg细胞和IL-35的水平，得到实验数据后用统计学方法对两组数据进行统计描述和分析，并以此来比较分析肝脏泡型包虫病患者和健康志愿者的外周血中CD4+CD25+CD127low Treg细胞和相关细胞因子IL-35的表达水平的差异。肝脏泡型包虫病患者接受手术后第7天再次采集外周血检测CD4+CD25+CD127low Treg细胞和IL-35的水平，比较与术前的变化。　　结果：在本次研究中发现肝脏泡型包虫病患者组的外周血中的CD4+CD25+CD127low Treg细胞占CD4+T细胞的比例为4.68／～10.30(7.97±1.47)％高于健康志愿者对照组外周血中CD4+CD25+CD127low Treg细胞占CD4+T细胞的比例5.09～9.25(6.65±0.99)％，且两组间差异有统计学意义(P＜0.01)。在肝脏泡型包虫病患者组的外周血中测得IL-35的表达水平为66.24／～101.23(81.26±10.42)pg/ml高于健康志愿者对照组的外周血中IL-35的表达水平19.59～79.64(42.61±17.80)pg/ml，且两组间差异有统计学意义(P＜0.001)。肝脏泡型包虫病患者外周血中的IL-35与CD4+CD25+CD127low Treg细胞的水平同步升高，并且使用线性相关分析的统计学方法进行分析后得出两者之间呈正相关关系（R=0.5667，P=0.0101)。肝脏泡型包虫病患者组在接受手术后第7天再次检测外周血中的CD4+CD25+CD127low Treg细胞占CD4+T细胞的比例为4.29～8.29(6.23±1.10)％，与术前和健康对照组相比，三者间的差异有统计学意义(F=9.65，P＜0.001)，术后与术前相比降低，且差异有统计学意义（t=3.05，P＜0.001）;术后与健康对照组间无统计学差异(t=1.19，P＞0.05)。肝脏泡型包虫病患者组在接受手术后第7天再次检测外周血中的IL-35为29.24～71.24(51.90±11.78)pg/ml，与术前和健康对照组相比，三者间的差异有统计学意义(F=36.79，P＜0.001)，术后较术前有所降低，且差异有统计学意义(t=7.70，P＜0.001);术后与健康对照组间无统计学差异(t=1.79，P＞0.05)。　　结论：本研究首次发现肝脏泡型包虫病患者外周血中IL-35的表达水平较健康志愿者显著升高，且与CD4+CD25+CD127low Treg细胞的增加呈正性相关关系。手术切除包虫病灶后，患者外周血中CD4+CD25+CD127low Treg细胞和IL-35较术前均降低。这一现象提示CD4+CD25+CD127low Treg细胞和IL-35可能共同参与了肝脏泡型包虫病感染泡状棘球蚴后的免疫应答过程，并且CD4+CD25+CD127low Treg细胞的作用可能与IL-35有重要的关联，它们均可能与肝脏泡型包虫病的发生发展有关。

目录

摘要

前言

材料与方法

1 研究对象

2 主要实验试剂和耗材

3 主要实验仪器

4 实验方法

5 统计学方法

结果

1．17例肝脏泡型包虫病患者的基本信息和临床资料

2．流式细胞术检测设门及流式细胞染色分析图

3．肝脏泡型包虫病患者组和健康对照组外周血中CD4+CD25+CD127low Treg／CD4+T细胞的比例的比较

4．肝脏泡型包虫病患者组和健康对照组外周血中IL-35的表达水平比较

5．肝脏泡型包虫病患者组的外周血中IL-35和CD4+CD25+CD127low Treg细胞的表达水平的相关性分析

6．肝脏泡型包虫病患者组接受手术后第7天外周血中CD4+CD25+CD127low Treg细胞和IL-35表达水平的变化

讨论

1 宿主体内的免疫环境对肝脏泡型包虫病发生发展的影响

2 Treg细胞对于肝脏泡型包虫病发病机制中的作用

3 IL-35在肝脏泡型包虫病发病机割中的作用

结论

参考文献

英汉缩略词对照表

致谢

泡型包虫病的相关免疫研究进展 综述

在校期间发表论文情况

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