氟尿嘧啶注射液及氟尿嘧啶植入剂对食管癌细胞的抑制效果和临床应用研究

摘要

目的：食管癌是发病率较高的常见恶性肿瘤，在恶性肿瘤的死亡原因中排在前列，氟尿嘧啶作为消化道恶性肿瘤化疗的传统经典药物，在消化道恶性肿瘤的治疗中发挥重要作用。本实验为进一步探讨抗肿瘤药物5-氟尿嘧啶(5-Fu)类药物在食管癌治疗中的应用潜力,我们通过体外实验设计验证了5-氟尿嘧啶及氟尿嘧啶植入剂对人食管癌TE-1细胞株生长的杀伤作用和诱导凋亡的能力,探寻有效的诱导肿瘤细胞凋亡的浓度和作用时间,为临床制定合理的化疗方案提供实验室依据。通过临床应用研究进一步验证了氟尿嘧啶植入剂治疗食管癌的安全性及有效性。　　方法：　　第一部分、以体外培养的人食管癌TE-1细胞株为实验研究对象，分别用5-氟尿嘧啶和氟尿嘧啶植入剂作用于TE-1，分别在不同时间点进行细胞计数，找出凋亡明显的药物浓度及作用时间，并利用细胞凋亡检测试剂盒进一步检测不同质量浓度及不同时间5-氟尿嘧啶及氟尿嘧啶植入剂对TE-1细胞生长的影响，以期望筛选出最适合的药物质量浓度和作用时间。具体的实验设计包括以下两个方面，　　1.5-氟尿嘧啶对TE-1细胞增殖的抑制作用：根据文献数据和预实验将5-氟尿嘧啶组设四个浓度组0μg/ml、10μg/ml、50μg/ml、100μg/ml，分别处理TE-1细胞24h、48h、72h、96h后进行细胞计数，找出凋亡明显的药物浓度及作用时间，并且利用细胞凋亡检测试剂盒进行凋亡检测。　　2.氟尿嘧啶植入剂对TE-1细胞增殖的抑制作用：用氟尿嘧啶为内标物，利用高效液相色谱法（HPLC）检测，绘制氟尿嘧啶标准曲线，测量不同时间氟尿嘧啶植入剂的释放浓度，依次在24h、48h、72h、96h处理TE-1细胞，找出凋亡明显的药物浓度及作用时间，并进行细胞的凋亡检测。第二部分：收集本院住院患者中行氟尿嘧啶植入剂治疗食管癌的病例，在内镜直视下，将病灶以1.0cm的层间距分为若干层，每层内以每间隔1.0cm种植一枚缓释化疗粒子；植入时每点植入10mg，依病情需要，每4周植入1次，种植3次为1个疗程。此项研究中全部病患均顺利完成治疗。通过比对研究病患在治疗前、治疗后3个月及治疗后6个月的临床症状缓解情况、病灶面积变化情况、吞咽困难改善情况、不良反应、生活质量等。　　结果：　　1.5-氟尿嘧啶对人食管癌细胞株 TE-1细胞周期的抑制与药物处理的时间具有很强的相关性，在浓度为10μg/ml时对TE-1作用明显，增加药物浓度并不能够明显地增加药物作用的效果，且作用96小时时开始产生明显差异，但进行凋亡检测未见明显的凋亡细胞。　　2.使用高效液相色谱（HPLC）测定氟尿嘧啶植入剂释放量，发现缓释化疗粒子释放的药物浓度随着时间的延长逐渐增加，到了48h以后基本维持平衡了，而且后面的浓度反而有点下降，氟尿嘧啶植入剂处理TE-1细胞，发现不同时间有不同作用影响，当48h-72h时间段细胞数减少的最明显，作用浓度约为282μg/ml，96小时内作用时间越长作用越明显，并且能够明显地检测到凋亡细胞。　　3.治疗前分别与治疗3、6个月比较，患者病变面积、吞咽困难分级变化差异有统计学意义（P<0.05）；但生活质量改善情况差异无统计学意义（P>0.05，原因可能是随访时间较短及样本量较少，未体现出个体之间差异）；另外治疗前与治疗3个月白细胞（WBC）差异有统计学意义（P<0.05）；治疗前、治疗3和6个月并发症情况发生率差异无统计学意义。　　结论：　　1.氟尿嘧啶注射液及氟尿嘧啶植入剂对人食管癌细胞株均有抑制其增殖的作用。　　2.氟尿嘧啶植入剂释放浓度稳定，有能促进人食管癌细胞株TE-1凋亡的作用，且96小时内时间越长作用越明显。　　3.氟尿嘧啶植入剂对食管癌细胞株的抑制效果优于氟尿嘧啶注射液。　　4.内镜下植入5-氟尿嘧啶（5-FU）缓释粒子治疗晚期食管癌，是一种安全有效、毒副作用小、耐受性好的姑息治疗方法。

目录

中英文缩略词对照表

第一部分 细胞实验

前言

材料与方法

1 实验材料与仪器

2 主要实验试剂

3 主要实验仪器和耗材

4 实验方法

结果

1 氟尿嘧啶注射液对人食管癌细胞株TE-1的影响

2 氟尿嘧啶植入剂对人食管癌细胞系TE-1细胞的影响

讨论

第二部分 临床应用研究

前言

材料与方法

1 对象

结果

1.1 治疗前与治疗3和6个月比较

1.2 生活质量评价

1.3 不良反应

1.4 并发症

讨论

结论

参考文献

综述:食管癌内镜下诊治进展

声明

致谢