电针联合BMSCs移植治疗对脑出血大鼠脑组织内Glu及其受体GluR2、NMDAR2A表达的影响

摘要

目的:观察脑出血(intracerebral hemorrhage，ICH)大鼠在电针(electro-acupuncture，Ea)联合骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymalstem cells，BMSCs)移植治疗下，血清中髓磷脂碱性蛋白(myelin basicprotein，MBP)的含量和血肿周边脑组织兴奋性神经递质谷氨酸(glutamate，Glu)及其受体N-甲基-D-天门冬氨酸受体-2A(N-methyl-D-aspartatereceptor-2A，NMDAR2A)、谷氨酸受体-2（glutamate receptor-2，GluR2）的表达，探讨联合治疗方案的可能机制。　　方法:(1)培养BMSCs:将冻存的BMSCs通过常规复苏、传代及诱导后，调整细胞浓度至2.5×107个/mL待移植使用。(2)构建ICH大鼠模型:选用SD大鼠，向其右侧尾壳核注射胶原酶和肝素以构建ICH模型。术后分3次（2h、24h、48h时）行神经损害程度评分(neurological severity score，NSS评分)，任意1次得分在9分以上者视为造模成功。(3)动物分组:将造模成功的大鼠随机分成BMSCs移植组(BMSCs组)、生理盐水组(NS组)、电针联合BMSCs细胞移植组（Ea-BMSCs组）、电针治疗组（Ea组）4组，于造模成功后第3d分别采用注入20μl BMSCs、20μl生理盐水、20μl BMSCs并辅以电针刺激（百会穴和大椎穴）及单纯电针刺激予以治疗。各组继分为治疗后1d、3d、5d、7d和14d共5个亚组，于相应时间点对大鼠NSS评分后再采血收集血清，处死大鼠取脑备用。(4)酶联免疫吸附测定血清中MBP的含量。(5)免疫组织化学检测Glu及其受体GluR2、NMDAR2A的表达。　　结果:(1) NSS评分结果（造模成功第3d，对各组分别实施干预后）:Ea-BMSCs组在第3d、5d、7d、14d与同时间点NS组、Ea组、BMSCs组比较，NSS评分显著下降(P＜0.05);BMSCs组在第3d、5d、7d、14d与同时间点NS组比较，NSS评分显著下降(P＜0.05);Ea组在第3d、5d、7d和14d与同时间点NS组比较，NSS评分明显下降(P＜0.05)。(2)出血灶周围表达的Glu积分光密度值（integral optical density, IOD）:各组Glu表达在1d时均快速上升，3d时达峰值，随后缓慢下降。Ea-BMSCs组Glu的表达，在各时间点与同一时间NS组、Ea组、BMSCs组比较，明显下降，差异显著(P＜0.05）。BMSCs组、Ea组Glu的表达，在3d、5d、7d时与同时间点NS组比较，明显下降，差异显著(P＜0.05）。(3)出血灶周围表达的NMDAR2A的IOD:各组NMDAR2A表达均在第1d时开始升高，第3d时达到峰值;然后回落。Ea-BMSCs组NMDAR2A的表达在各时间点与同时间点NS组相比较，表达下降，差异显著(P＜0.05）;在第3d、5d、7d与同时间点Ea组比较，表达下降，差异显著(P＜0.05）;在第3d、5d与同时间点BMSCs组比较，表达下降，差异显著(P＜0.05）。BMSCs组NMDAR2A的表达在第1d、3d、5d、7d时与同时间点NS组相比较，表达下降，差异显著(P＜0.05);Ea组NMDAR2A的表达在第3d、5d、7d时与同时间点NS组相比较，表达下降，差异显著(P＜0.05）。(4)出血灶周围表达的GluR2的IOD:各组GluR2表达在第1d时轻微升高，呈弱阳性表达。随时间推移,阳性表达逐渐增强，第7d时达最高，以Ea-BMSCs组的升高最为显著。Ea-BMSCs组GluR2的表达在各时间点与同时间点BMSCs组、Ea组、NS组相比较，均表达增高，差异显著（P＜0.05）。BMSCs组、Ea组GluR2的表达在各时间点与同时间点NS组相比较，表达增高，差异显著(P＜0.05）。(5)各组血清MBP含量的检测结果:BMSCs组MBP表达第5d、7d、14d高于Ea-BMSCs组(P＜0.05); Ea组第1d、3d时MBP表达低于Ea-BMSCs组(P＜0.05)，第14d高于Ea-BMSCs组(P＜0.05)。与NS组比较: Ea-BMSCs组第5d、7d、14d MBP表达明显低于NS组(P＜0.01);BMSCs组第14d低于NS组(P＜0.05); Ea组第5d、7d、14d低于NS组(P＜0.05)。　　结论:(1)电针联合BMSCs移植治疗ICH大鼠较单纯电针刺激或BMSCs移植更能降低出血灶周边区Glu、NMDAR2A的表达，减轻其介导的兴奋毒性作用对脑的损伤;(2)电针联合BMSCs移植治疗ICH大鼠较单纯电针刺激或BMSCs移植更能促进出血灶周边区GluR2的表达，减少Ca2+内流，减轻钙超载所致脑组织的损伤;(3)电针联合BMSCs移植治疗ICH大鼠较单纯电针刺激或BMSCs移植更能降低血清MBP的含量，减轻其脱髓鞘反应。

目录

摘要

前言

材料与方法

1 实验材料与仪器

2 实验方法

3 统计学处理

结果

1 神经功能缺损评分(NSS评分)

2．脑组织块冠状面出血灶及周围区观察

3 免疫组织化学法检测结果

4 各组血清MBP含量的检测结果

讨论

1 ICH的研究现状

2 ICH动物模型的选取

3 出血灶周围Glu及其受体GluR2、NMDAR2A的表达及意义

4 各组血清MBP的含量

结论

参考文献

英汉缩略词对照表

致谢

综述 Glu及其受体NMDAR2、GluR2在脑出血中的作用

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