固公果根涩肠止泻的活性成分研究

摘要

本研究以彝族民间药材固公果根 60％乙醇提取物为研究对象，利用离体肠实验方法考察了固公果根总提取物抑制SD大鼠的十二指肠、空肠、回肠和结肠四个不同肠段的收缩效果，结果显示对十二指肠、空肠、回肠和结肠的最高抑制率分别为19.09±4.54％、27.71±4.20％、16.36±1.87％、13.20±4.28％,说明固公果根总提取物对四个不同肠段收缩均具有抑制作用，同时发现固公果根总提取物对于抑制空肠平滑肌的收缩作用效果最为显著，且抑制作用效果为空肠＞十二指肠＞回肠＞结肠，结果具有显著性差异。在此基础上结合各极性萃取物的得率，以空肠为实验肠段考察固公果根四个不同极性萃取物抑制空肠平滑肌收缩的作用效果，结果显示二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇和水萃取物对空肠平滑肌的最高抑制率分别为 24.22±2.73％、25.84±3.05％、32.20±3.67％、18.75±3.24％，说明固公果根四个不同极性萃取物对空肠平滑肌的收缩均具有抑制作用，同时发现，正丁醇萃取物对空肠的作用效果最为显著。同时又考察等浓度下固公果根四个不同极性萃取物对空肠平滑肌抑制的作用效果，结果显示低浓度下二氯甲烷萃取物对空肠平滑肌收缩的抑制作用效果最为显著，随着浓度的增加，正丁醇萃取物的量效关系更加显著。综合分析以上实验结果，选取固公果根正丁醇萃取物作为其涩肠止泻的活性部位，进一步研究其物质组成。　　利用硅胶柱色谱、ODS柱色谱、Sephadex LH-20柱色谱以及制备型反相HPLC等分离方法对固公果根正丁醇萃取物的化学成分进行系统研究，共分离得到26个单体化合物。通过薄层、理化性质和现代波谱学技术（1H NMR、13C NMR、HSQC、HMBC、COSY）等手段鉴定了它们的结构，分别为 β-谷甾醇（1）、2-氧代-坡模醇酸（2）、野鸦春酸（3）、覆盆子酸（4）、2α, 19α-二羟基-3-羰基-乌苏-12-烯-28羧酸（5）、齐墩果酸（6）、熊果酸（7）、2α, 3α, 19α, 23-四羟基-乌苏-12烯-28羧酸（8）、委陵菜酸（9）、1α, 2α,3β, 19α-四羟基-乌苏-12-烯-28羧酸（10）、蔷薇酸（11）、sericic acid （12）、冬青苷B（13）、野蔷薇酸（14）、2α, 3β, 19β-三羟基-乌苏-12-烯-28羧酸（15）、（﹢）-儿茶素（16）、（﹣）-表儿茶素（17）、24-deoxy-sericoside（18）、Kaji-ichigoside F1（19）、野蔷薇苷（20）、新异甘草苷（21）、2α,3α,19α, 23-tetrahydroxyurs-12-en-28-oic acid-28-O-β-D-glucopyranosyl ester（22）、1β,2α,3α,19α-tetrahydroxyurs-12-en-28-oic acid β-D-glucopyranosyl ester（23）、sericoside（24）、2-oxo-3β,19α,23-trihydroxyurs-12-en-28-oicacid-β-D-glucopyranosyl ester（25）、没食子酸（26）。化合物21、23、25为首次在蔷薇科植物中分离得到，化合物5、18为首次在蔷薇属植物中分离得到，化合物2、4、10、12、14、24为首次在该植物中分离得到。　　本文测定了单体化合物对大鼠离体空肠平滑肌张力影响的活性，研究结果显示，在终浓度为2.5μmol/l、5.0μmol/l、10.0μmol/l、20.0μmol/l、40.0μmol/l的浓度梯度范围内，随浓度增加，化合物3、8、10、12、13、16、20、22、23、24均可以使离体空肠平滑肌张力显著降低，与空白组相比，差异具有统计学意义（P＜0.05），且化合物3、8、10、16、20、22、24差异非常显著（P＜0.01）。化合物17和26可使离体空肠平滑肌张力显著升高，与空白组相比，差异具有统计学意义（P＜0.05）。化合物1、2、4、5、6、7、9、11、14、15、18、19、21、25与空白组相比，差异无统计学意义（P＞0.05）。选取对大鼠离体空肠平滑肌收缩具有抑制效果（差异具有统计学意义：P＜0.05）的化合物3、8、10、12、13、16、20、22、23、24，根据张力变化计算抑制率，结果显示抑制率由大到小为化合物 22、20、3、16、24、13、8、10、12、23，表明化合物涩肠止泻的活性由强到弱分别为化合物 22＞20＞3＞16＞24＞13＞8＞10＞12＞23，结果具有统计学意义。　　结合化合物的结构进行分析，化合物22、20、3、24、13、8、10、12、23结构上多含三个以上的羟基且大多为连糖的三萜皂苷，推测固公果根中涩肠止泻的活性可能与三萜类化合物母核上羟基的数目以及是否连糖有关。化合物16和17除了3位羟基的构型不同以外，其他部分结构均相同，但对于空肠平滑肌的作用效果却完全不同，这一发现可以为后续研究提供有价值的参考。　　本文首次研究了固公果根涩肠止泻的活性，明确了三萜类成分对离体肠收缩具有一定的抑制作用，初步探讨了其构效关系，研究结果为该药材的临床应用及产品开发奠定了理论和实验基础。

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