二陈汤加味方对COPD大鼠肺血管的影响及干预研究

摘要

目的：　　研究二陈汤加味方对慢性阻塞性肺疾病（Chronic Obstructive Pulmonary Disease,COPD）大鼠肺血管的影响及其分子机制。　　方法：　　将70只SD大鼠随机分为7组、平均每组10只大鼠，包括对照组、模型组、二陈汤组（5g?kg-1?d-1）、二陈汤加味10、20、40g?kg-1?d-1，分别称为低、中、高剂量组，复方满山红糖浆组（2.9g?kg-1?d-1）。采用气管滴注脂多糖（lipopolysaccharide,LPS)以及烟熏的方法制备COPD大鼠模型，并依据肺病理和肺功能变化评价模型是否制备成功。造模完成之后,灌胃给予二陈汤加味方、二陈汤、复方满山红；记录各组大鼠每天的体重、毛色、咳、喘等特征，使用呼气流量峰值（Peak expiratory flow,PEF）、潮气量(Tidal volume,TV)等指标判定大鼠肺功能是否正常，酶联免疫吸附测定法(Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay,ELISA)测定大鼠血清、支气管肺泡灌洗液和肺组织中匀浆液中白细胞介素-4（interleukin-4,IL-4）和白细胞介素-1β（interleukin1β,IL-1β）的含量，使用光镜检察其肺血管和组织的病理结构改变，免疫组织化学方法(Immunohistochemistry,IHC)检测其肺组织血管内皮生长因子（Vascular Endothelial Growth Factor,VEGF）及其受体(Vascular Endothelial Growth Factor Receptor-2,VEGFR2)、内皮素-1（Endothelin1,ET-1）、沉默信息调节因子1（Sirt1）蛋白的表达。　　结果：　　与对照组相比，模型组大鼠肺功能呼气流量峰值、潮气量的含量均显著减小（P＜0.01），血清、支气管肺泡灌洗液和肺组织匀浆液中IL-4、IL-1β的含量均显著升高（均P＜0.01），模型组肺组织VEGF、VEGFR2、ET-1的蛋白表达显著增强（P＜0.05），Sirt1表达显著减弱（P＜0.05）。与模型组相比，各治疗组呼气流量峰值、潮气量的含量均有程度不等的增加（P＜0.01）；各治疗组血清、肺组织匀浆液及支气管肺泡灌洗液中IL-4，IL-1β含量均有程度不等的减少（P＜0.01），各治疗组VEGF、VEGFR2、ET-1的表达均有程度不等的降低（P＜0.05），各治疗组Sirt1的表达均有程度不等的升高（P＜0.05）。分别与二陈汤组、复方满山红糖浆组比较，余治疗组中二陈汤加味中剂量组肺功能呼气流量峰值、潮气量显著升高；分别与二陈汤组、复方满山红糖浆组比较，余治疗组中二陈汤加味中剂量组血清、肺组织匀浆液及支气管肺泡灌洗液中IL-4，IL-1β含量显著降低；分别与二陈汤组、复方满山红糖浆组比较，余治疗组中二陈汤加味中剂量组VEGF、VEGFR2、ET-1的表达显著降低，Sirt1的表达显著升高。　　病理变化：大体观，对照组表面光滑，颜色红润。模型组可见表面粗糙，颜色暗红。镜下观,对照组肺组织结构完整，毛细血管、细支气管无明显异常，无炎症细胞聚集，管壁无纤维增生；模型组肺组织血管壁平滑肌细胞显著增生肥大,管外细胞外基质显著增多,管腔狭窄；与模型组相比较，二陈汤加味中剂量组肺部血管壁平滑肌细胞的增生、肥大明显减轻，管壁中的细胞外基质明显减少，炎细胞基本消失。二陈汤加味中剂量组症状改善优于二陈汤加味高、低剂量组、二陈汤组和复方满山红糖浆组。　　结论：　　1.二陈汤加味方能有效改善COPD大鼠气流受限和肺功能，保护肺组织，以肺组织病理变化为证。　　2.二陈汤加味方方通过减少COPD大鼠血清、肺组织匀浆液和支气管肺泡灌洗液中IL-4、IL-1β的合成与分泌，增强肺组织中Sirt1的蛋白表达，对抗COPD大鼠的肺组织炎症。　　3.二陈汤加味方通过抑制VEGF、VEGFR2、ET-1的蛋白表达阻止肺血管重构，减缓COPD及其并发症的发病进程。

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摘要

ABSTRACT

英汉词汇对照表

前言

材料与方法

1 材料

2 方法

结果

1 大鼠一般情况

2 大鼠肺功能

3 大鼠血清、肺组织匀浆液、支气管肺泡灌洗液中IL-4、IL-1β的含量

4 大鼠肺组织形态学观察（HE）

5 Sirt1蛋白表达

6大鼠肺血管相关的指标

6.1大鼠小动脉的厚度

6.2.各组大鼠肺组织中VEGF、VEGFR2的蛋白表达

6.3各组大鼠肺组织中ET-1的蛋白表达

讨论

1 二陈汤加味方对COPD大鼠一般状况的影响及意义

2 二陈汤加味方对COPD肺功能的影响及意义

3 二陈汤加味方对COPD细胞因子IL-4、IL-1β的影响及意义

4 二陈汤加味方对COPD大鼠肺组织病理的影响及意义

5 二陈汤加味方对COPD肺血管中Sirt1蛋白表达的影响及意义

6 二陈汤加味方对COPD肺血管的影响及意义

6.1二陈汤加味方对肺血管厚度的影响及意义

6.2 二陈汤加味方对COPD肺血管中VEGF、VEGFR2蛋白表达的影响及意义

6.3 二陈汤加味方对COPD肺血管中ET-1蛋白表达的影响及意义

7 中医对COPD的认识及二陈汤加味方的选方组药依据

结论

参考文献

致谢

附录1 HE及IHC图片

附录2 综述

附录3 在校期间科研与论文发表情况