启膈散增加食管癌EC9706细胞对顺铂敏感性机制研究

摘要

目的:　　通过研究启膈散含药血清联合顺铂对人食管癌细胞 EC9706的增殖、凋亡、周期及相关基因 miR-21 PDCD4 PTEN及蛋白表达的调控作用，初步探讨启膈散增加人食管癌 EC9706细胞对顺铂敏感性机制，为临床应用提供理论依据。　　方法:　　制备启膈散含药血清，用不同浓度的含药血清与同浓度的顺铂联合作用于 EC9706细胞48h，用 MTT法筛选出最有效的含药血清浓度（5%含药血清）。分别用5%含药血清与顺铂、5%对照血清与顺铂、5%含药血清、5%对照血清作用于 EC9706细胞，应用流式细胞仪检测其对 EC9706细胞凋亡、周期的影响；应用 PCR检测相关基因 miR-21、PDCD4、PTEN表达情况；应用 Western-blot法检测相关蛋白 PDCD4、PTEN表达水平。　　结果:　　1.10%、5%、2.5%含药血清与顺铂联合应用时都有协同作用，其中5%含药血清与顺铂协同增效作用最为显著。　　2. EC9706细胞经不同浓度药物作用48h后，与对照组相比较，除5%含药血清组外（P＞0.05），顺铂低浓度、高浓度组、含药血清联合高浓度顺铂、含药血清联合低浓度顺铂组，细胞凋亡率均升高，有统计学意义（P＜0.05）；与单独5%含药血清组比较，联合低浓度顺铂组与高浓度顺铂组细胞的凋亡率也有升高（P＜0.05），分别于同浓度的顺铂组比较，含药血清联合低浓度顺铂组凋亡率升高（P＜0.05），联合高浓度组没有差异（P＞0.05）。　　3. EC9706细胞经不同浓度药物作用48h后，与对照血清比较，加入顺铂后 S期的细胞比例均增加（P＜0.05），其中0.5μg/ml顺铂组升高最为显著。含药血清联合高浓度顺铂比单独使用同浓度顺铂 S期比例增加， G2期降低（P＜0.05），有统计学意义；含药血清联合低浓度顺铂与单独使用同浓度顺铂相比无统计学差异（P＞0.05）。　　4.与5%对照血清组比较，其余各组 miR-21相对定量都有升高（P＜0.05）；无论高浓度顺铂组还是低浓度顺铂组，联合含药血清后，miR-21相对定量均比单用下降（P＜0.05）。表-5结果示：与5%对照血清组相比，除5%含药血清 PDCD4表达量下降外，其余各组表达量升高（P＜0.05）；低浓度顺铂联合血清组比其单独使用 PDCD4表达量升高（P＜0.05），高浓度顺铂联合血清组比其单独使用 PDCD4表达量则下降（P＞0.05）；与5%对照血清组相比，0.5μg/ml顺铂组与5%含药血清组 PTEN表达量降低，其余组均升高（P＜0.05），顺铂联合血清两组均比单独顺铂两组 PTEN表达量高（P＜0.05）。　　5.与对照组相比，各组 PDCD4蛋白表达量升高 P＜0.05；高浓度顺铂联合含药血清组比单用高顺铂组 PDCD4蛋白表达量升高（P＜0.05），低浓度顺铂的两组变化不明显（P＞0.05）；两个浓度顺铂联合含药血清时PTEN的表达量均高于单独使用顺铂（P＜0.05）。　　结论:　　1.启膈散联合顺铂应用对人食管癌细胞株 EC9706抑制有协同作用。　　2.启膈散能过提高顺铂诱导人食管癌细胞株 EC9706凋亡的作用和 S期的阻滞率。　　3.启膈散联合顺铂可以下调 miR-21表达，上调靶基因 PDCD4mRNA与PTENmRNA及其蛋白的表达。启膈散能够增加 EC9706对顺铂的敏感性，而且这一机制可能是通过 miR-21与其介导调控的其下游的靶基因PDCD4mRNA与 PTEN共同参与完成的。

目录

声明

英文缩写对照表

前言

实验一 启膈散含药血清和顺铂对人食管癌 EC9706 细胞生长的抑制作用

材料与方法

实验结果

实验结论

实验二 启膈散含药血清联合顺铂对 EC9706细胞的凋亡、周期影响

材料与方法

实验结果

实验结论

实验三 启膈散含药血清联合顺铂对 EC9706 细胞中miR-21、PTEN、PDCD4 基因表达影响

材料与方法

实验结果

实验结论

实验四 启膈散含药血清联合顺铂对EC9706细胞PDCD4、PTEN 蛋白表达影响

材料与方法

实验结果

实验结论

讨论

1.中医理论对食管癌的阐释

2.启膈散、顺铂的临床应用

3.实验结果讨论

结论

致谢

参考文献

附录 1：附图

附录 2：综述:中药逆转肿瘤多药耐药机制的研究进展