止血带休克后主动脉RAS稳态失衡在血管低反应性及损伤中的作用

摘要

目的：肾素血管紧张素系统（renin angiotensin systems，RAS）内在稳态失衡在多种疾病及损伤中发挥重要作用。本实验主要研究止血带休克（tourniquet shock，TS）后RAS稳态失衡在血管低反应性及损伤中的作用，为揭示血管低反应发生机制及治疗策略提供新的思路。　　方法：1 TS模型的制备：8月龄C57B6的雄性小鼠，止血带套扎双后肢阻断血流，2h后解套扎进行再灌注。实验第一部分分7组，对照组及6个模型组，模型组分别于再灌注10min、1h、2h、4h、6h、12h后处死，对照组不进行套扎与再灌注，其余操作同模型组。实验第二部分分5组，即野生对照组（WT）、野生-休克组（WT-TS）、野生-休克-给药组（WT-TS-DIZE）、血管紧张素转换酶2（Angiotensin converting enzyme2，ACE2）的基因敲除对照组（KO）、基因敲除-休克组（KO-TS），给药组于实验前以10mg/kg/d的剂量给予ACE2的激动剂——二乙酰胺三氮脒（Diminazene Diaceturate，DIZE）进行皮下注射给药，共计28天，WT-TS、WT-TS-DIZE、KO-TS各组缺血2h再灌注4h后处死小鼠，WT、KO各组不进行套扎与再灌注，其余操作同模型组。2损伤指标的测定：多普勒血流仪测定肢体血流障碍，颈动脉插管法测定血压值，离体血管张力测定仪测定主动脉血管收缩反应性，HE染色结合透射电镜评价血管形态学损伤。3 RAS成分测定：蛋白免疫印迹法（western blot，WB）检测血管组织中血管紧张素 II1型受体（AT1）、血管紧张素（1-7）受体（Mas)、血管紧张素转换酶（Angiotensin converting enzyme，ACE）、ACE2蛋白的表达。采用酶联免疫吸附法（Enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）检测血清中血管紧张素II（AngiotensinⅡ，AngII）/血管紧张素（1-7）（Angiotensin1-7，Ang(1-7)）含量。　　结果：实验第一部分结果显示，与对照组小鼠相比，模型组小鼠肢体血流量随着再灌注时间的延长逐渐减少；血压在再灌注10min时间点先升高随后逐渐降低；主动脉血管对去甲肾上腺素（Noradrenalin，NE）的反应性在再灌注10min时间点升高随后下降、再灌注4h时间点的血管反应性最低；形态学损伤评分逐渐增高；主动脉血管AT1受体与ACE2蛋白表达下降；Mas受体与ACE蛋白表达升高；血清中AngⅡ的含量升高，Ang(1-7)的含量降低。实验第二部分结果显示，与WT-TS组相比，WT-TS-DIZE组主动脉对NE的反应性明显升高，血管损伤程度明显减轻，AT1受体、ACE2表达升高，Mas受体表达降低，ACE表达基本无变化，血清AngII生成减少，Ang(1-7)生成增多；与WT相比，KO组主动脉血管对NE反应性升高，形态学损伤程度不明显，主动脉血管AT1、MAS、ACE蛋白表达均增高，ACE2无表达，血清AngII生成增多，Ang(1-7)基本无变化；与WT-TS相比，KO-TS组主动脉对NE的反应性明显下降，形态学损伤程度增高不明显，主动脉血管AT1与ACE表达增高不明显，Mas增高明显（P<0.05），ACE2无表达，血清AngII、Ang(1-7)变化不明显。　　结论：1止血带休克后RAS系统激活，随着再灌注时间的延长，血管低反应性及损伤程度均增加，主动脉ACE/AngII/AT1轴与ACE2/Ang(1-7)/Mas轴表达失衡，且两轴随再灌时间延长差异性表达愈加明显，提示RAS稳态失衡与血管低反应性的发生及损伤可能有关。2以ACE2为靶点改善RAS稳态失衡有可能提高主动脉血管的反应性、减轻血管损伤，对临床上休克晚期血管低反应性的治疗提供了新思路。

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引言

第1章 止血带休克后主动脉血管反应性及RAS成分的变化

1.1 材料与方法

1.2 结果

1.3 讨论

1.4 小结

参考文献

第2章 ACE2蛋白上调或缺失对血管低反应性的影响

2.1 材料与方法

2.2 结果

2.3 讨论

2.4 小结

参考文献

第3章 综 述:休克后血管低反应性与肾素-血管紧张素系统的关系

3.1 休克后血管低反应性发生机制概述

3.2 肾素-血管紧张素系统简述

3.3 RAS稳态失衡在血管低反应性中的作用

3.4 结语与展望

参考文献

结论

致谢

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