GRPR受体拮抗剂RM26多聚体的18F标记和生物性质研究

摘要

目的：肿瘤细胞与正常细胞具有明显不同的生物学特征，多种肿瘤细胞过度表达的胃泌素释放肽受体（Gastrin Releasing Peptide Receptor,GRPR），靶向GRPR拮抗剂RM26较激动剂具有较好的优势，因此GRPR拮抗剂类似物成为高表达GRPR的肿瘤靶向诊断和放射性治疗的研究热点。单体RM26小分子多肽在体内生物稳定性受限且肿瘤/背景比较差，本文拟通过RM26肽同质多价载体的构思克服单体的缺陷，合成RM26的二聚体，三聚体，用荧光法研究人前列腺癌肿瘤细胞PC-3对不同RM26多聚体的细胞摄取及靶向性质；通过连接螯合剂NOTA，利用Al18F络合标记法标记NOTA-[RM26]、NOTA-3P-[RM26]2、NOTA-4P-[RM26]3，探索RM26多聚体在PC-3荷瘤鼠体内的肿瘤摄取和生物分布。　　方法：(1)用液相合成FITC/NOTA-[RM26]、FITC/NOTA-3P-[RM26]2、FITC/NOTA-4P-[RM26]3，然后使用质谱表征、HPLC确认合成正确的目标化合物及其化学纯度；(2)利用共聚焦显像进行细胞摄取荧光定性实验，流式仪进行细胞摄取荧光半定量实验，MTS法测细胞毒性等，研究单体FITC-[RM26]，二聚体FITC-3P-[RM26]2、三聚体FITC-4P-[RM26]3在PC-3中的细胞摄取能力、特异性靶向能力、细胞毒性；(3)利用Al18F络合标记法标记NOTA-[RM26]、NOTA-3P-[RM26]2、NOTA-4P-[RM26]3，探索Al18F标记最优条件，建立分离纯化方法，测定各标记产物的放化学纯度以及体外的稳定性；(4)利用SPF BALB/c-n雄性裸鼠建立PC-3荷瘤鼠肿瘤模型用于体内实验，实验组尾静脉注射0.1mL剂量约为100uCi的Al18F-NOTA-[RM26]、Al18F-NOTA-3P-[RM26]2、Al18F-NOTA-4P-[RM26]3（n=3）；对照组注射同等体积及放射剂量的18F-FDG（n=3）；封闭实验组为预先注射50倍过量未标记BBN封闭5min，然后注射同等体积及放射剂量的三种标记物（n=3）；注射后5min、30min、60min、120min分别进行micro-PET/CT显像，研究单体与不同多聚体在PC-3荷瘤鼠体内肿瘤靶向摄取和体内生物分布；比较实验组、封闭组、对照组之间的差异，初步评价Al18F-NOTA-3P-[RM26]2、Al18F-NOTA-4P-[RM26]3用于肿瘤靶向显像诊断、治疗的应用价值。　　结果：(1)质谱表征确定成功合成目标产物FITC/NOTA-[RM26]、FITC/NOTA-3P-[RM26]2、FITC/NOTA-4P-[RM26]3，经HPLC/UV测定分离纯化后目标产物化学纯度均超过97％。(2)GRPR阳性的PC-3细胞与FITC-[RM26]、FITC-3P-[RM26]2、FITC-4P-[RM26]3结合速度快，添加带荧光的RM26多聚体15min后便能清楚地观察到细胞摄取荧光，并且在45min细胞摄取显著增加；荧光实验结果表明细胞摄取水平为FITC-[RM26]

目录

前言

材料与方法

1 实验材料与仪器

1.1 实验动物

1.2 实验细胞

2 主要实验试剂

2.1合成实验试剂

2.2细胞实验试剂

3 主要实验仪器

4.1 合成实验

4.2细胞实验