低雄激素状态对大鼠阴茎海绵体腺苷A2A和A2B受体表达的影响

摘要

目的：探讨低雄激素状态能否通过作用于腺苷A2A和A2B受体影响大鼠勃起功能。　　方法：8周龄健康雄性大鼠36只，随机分为6组：4周假手术组（A组：4w-sham group）、4周去势组（B组：4w-cast group）、4周去势睾酮替代组（C组：4w-cast+T group）、8周假手术组（D组：8w-sham group）、8周去势组（E组：8w-cast group）、8周去势睾酮替代组（F组：8w-cast+T group）。去势组（B、D组）及去势睾酮替代组（C、F组）大鼠予以手术去势，去势睾酮替代组（C、F组）大鼠手术去势后予以丙酸睾酮（3mg/kg qod）隔日皮下注射，其余各组皮下注射相应剂量植物油。分别在术后4周和8周测定各组大鼠体重、血清睾酮水平、最大阴茎海绵体内压/平均动脉压（ICPmax/MAP），免疫组化法检测A2A、A2B在各组大鼠阴茎海绵体组织中的表达情况，Western blot检测各组大鼠阴茎海绵体组织中A2A、A2B、AKT、eNOS的蛋白表达，ELISA检测各组大鼠阴茎海绵体组织cAMP和cGMP浓度。　　结果：各组大鼠体重（4w-sham：313.5±6.4g、4w-cast：313.7±8.5g、4w-cast+T:310.54±2.3g、8w-sham:312.6±7.8g、8w-cast：311.2±4.7g、8w-cast+T：316.6±3.8g）及MAP（4w-sham：106.98±3.98mmHg、4w-cast：104.51±1.82mmHg、4w-cast+T:105.43±4.70mmHg、8w-sham:104.63±2.63mmHg、8w-cast：106.67±4.58mmHg、8w-cast+T：107.80±4.53mmHg）均无显著差异。血清睾酮值：4w-cast组（1.67±0.38）较4w-sham组（21.45±1.87）和4w-cast+T组（21.46±1.89）显著降低（P＜0.01），8w-cast组（0.37±0.06）较8w-sham组（21.69±1.27）和8w-cast+T组（20.34±2.23）显著降低（P＜0.01），且8w-cast组较4w-cast组显著降低（P＜0.05），4w-sham组、4w-cast+T组、8w-sham组、8w-cast+T组无显著差异。3V/5V电刺激下ICPmax/MAP值：4w-cast组（0.40±0.02、0.53±0.03）较4w-sham组（0.68±0.03、0.79±0.03）和4w-cast+T组（0.68±0.02、0.79±0.02）显著降低（P＜0.01），8w-cast组（0.29±0.02、0.39±0.01）较8w-sham组（0.67±0.03、0.80±0.04）和8w-cast+T组（0.69±0.04、0.81±0.02）显著降低（P＜0.01），且8w-cast组较4w-cast组显著降低（P＜0.05），4w-sham组、4w-cast+T组、8w-sham组、8w-cast+T组无显著差异。免疫组化法检测A2A、A2B在海绵体组织中的表达情况：A2A在4w-sham组、4w-cast组、4w-cast+T组、8w-sham组、8w-cast组、8w-cast+T组的IOD值分别为：634.12±126.03、586.19±100.73、606.27±89.53、628.29±72.75、601.55±82.53、629.19±128.51，各组间无明显差异。A2B在4w-sham组、4w-cast组、4w-cast+T组、8w-sham组、8w-cast组、8w-cast+T组的IOD值分别为：1081.47±122.08、703.35±78.39、1141.25±136.64、1094.68±97.04、477.64±70.12、1184.16±150.41，其中去势组大鼠A2B的表达较同周龄假手术组和睾酮替代组均显著降低（P＜0.01），且8w-cast较4w-cast显著降低（P＜0.05），假手术组及去势睾酮替代组间无差异。Western blot检测A2A、A2B、AKT、eNOS的蛋白表达:A2A：4w-cast组（0.220±0.024）、4w-cast+T组（0.218±0.033）、4w-sham组（0.233±0.035）、8w-cast组（0.226±0.030）、8w-cast+T组（0.219±0.033）、8w-sham（0.228±0.036）组，各组间均无显著差异。A2B、AKT、eNOS：4w-cast组（0.076±0.008,0.104±0.008,0.235±0.012）较4w-cast+T组（0.320±0.038,0.500±0.035,0.541±0.025）和4w-sham组（0.324±0.042,0.492±0.011,0.544±0.027）显著降低（P＜0.01），8w-cast组（0.023±0.004,0.053±0.046,0.185±0.009）较8w-cast+T组（0.317±0.028,0.491±0.029,0.533±0.032）和8w-sham组（0.310±0.029,0.495±0.030,0.532±0.023）显著降低（P＜0.01），且8w-cast组较4w-cast组显著降低（P＜0.05），4w-cast+T组、4w-sham组、8w-cast+T组、8w-sham组无显著差异。ELISA结果显示：去势组（4w-cast：6.45±0.40,3.53±0.09pmol/mg protein；8w-cast:5.03±0.19,2.57±0.08pmol/mg protein）与去势睾酮替代组（4w-cast+T：12.22±1.11,6.42±0.20pmol/mg protein；8w-cast+T:11.95±0.21,6.59±0.15pmol/mg protein）、假手术组（4w-sham：12.17±0.38,6.59±0.24pmol/mg protein；8w-sham:11.68±0.62,6.35±0.11pmol/mg protein）相比，阴茎海绵体组织中cAMP和cGMP浓度均显著降低（P＜0.01），且8w-cast组较4w-cast组显著降低（P＜0.05），4w-cast+T组、4w-sham组、8w-cast+T组、8w-sham组无显著差异。　　结论：低雄激素状态不影响大鼠阴茎海绵体A2A受体的表达，但能通过抑制A2B受体的表达，抑制AKT/eNOS/cGMP信号通路，同时还降低阴茎海绵体中cAMP合成，导致去势大鼠ICPmax/MAP下降。

目录

前言

材料与方法

1 实验材料与仪器

2 主要实验试剂

3 主要实验仪器

4 实验方法

4.1 建立模型

4.2 各组大鼠最大阴茎海绵体内压（maximum intracavernous pressure,ICPmax）及平均动脉压（mean arterial pressure,MAP）测定

4.3 采血及阴茎海绵体标本收集

4.4 免疫组化法测定A2A、A2B 在大鼠阴茎海绵体中的表达

4.5 western blot 检测各组大鼠阴茎海绵体A2A、A2B、AKT、eNOS 蛋白表达

4.6 ELISA 法检测各组大鼠阴茎海绵体cGMP 和cAMP 浓度

5 数据统计分析

结果

1 各组大鼠体重、MAP及血清睾酮水平

2 各组大鼠勃起功能检测

3 免疫组化法检测A2A、A2B在各组大鼠阴茎海绵体中的表达情况

4 各组大鼠阴茎海绵体中A2A、A2B、AKT、eNOS蛋白的表达情况

5 各组大鼠阴茎海绵体组织中cAMP和cGMP浓度

6 大鼠血清睾酮水平与A2B受体的相关性分析

讨论

结论

参考文献

中英文缩略词对照表

致谢

综述:低雄激素相关勃起功能障碍的分子机制研究进展

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