MPLA对小肠隐窝细胞增殖及辐射损伤后再生的调控作用和机制研究

目录

声明

摘要

缩略词表

前言

第一部分LPS和MPLA促进小肠隐窝细胞的增殖和辐射损伤后的再生

一、引言

二、实验材料和方法

(一)实验试剂

(二)仪器设备

(三)实验动物

(四)辐射处理

(五)小肠类器官培养

(六)BRDU及EDU检测增殖实验

(七)小肠类器官免疫荧光实验

(八)小肠组织免疫荧光及免疫组化实验

(九)统计分析

三、实验结果

(一)TLlH主要分布在小肠隐窝

(二)LPS和MPLA促进小肠类器官的增殖

(三)LPS和MPLA促进小鼠小肠隐窝细胞的增殖

(四)LPS和MPLA对小肠增殖作用的影响依赖于TLR4分子

(五)LPS和MPLA促进辐照后小肠隐窝细胞再生

四、分析与讨论

第二部分LPS和MPLA激活小肠隐窝中调控干细胞增殖和再生相关的信号通路

一、引言

二、实验材料和方法

(一)实验试剂

(二)仪器设备

(三)RNA-sequencing(转录组测序)实验

(四)AAV-MSI2质粒筛选及构建

(五)AAU-SOX9质粒筛选及构建

(六)AAV-YAP1质粒筛选及构建

(七)腺相关病毒(AAV)的构建

(八)动物实验及AAV的使用

(九)辐射处理

(十)小肠类器官培养

(十四)免疫印迹(Western-Blot)实验

(十五)小肠组织免疫荧光及免疫组化实验

(十六)统计分析

三、实验结果

(一)RNA-sequencing实验

(二)LPS和MPLA对Wnt和Notch信号通路的调控作用

(三)LPS和MPLA促进小肠干细胞增殖分化关键调控分子c-Myc、MSI2、SOX9、YAP1蛋白上调

(四)TLR4介导Wnt、Notch信号通路以及c-Myc、MSI2、SOX9和YAP1蛋白的激活

(五)所构建的AAV均能特异性的敲低小肠中的基因

(六)LPS、MPLA对小肠隐窝细胞增殖作用的调控依赖c-Myc、MSI2、SOX9和YAP1蛋白

(七)LPS、MPLA促进小肠类器官辐射损伤后再生的作用依赖C．Myc、MSI2、SOX9和YAP1蛋白

四、分析与讨论

第三部分c-Myc、MSI2、SOX9和YAP1蛋白在LPS或MPLA刺激小肠隐窝后的相互作用关系研究

一、引言

二、实验材料和方法

(一)实验试剂

(二)仪器设备

(三)慢病毒质粒的构建

(四)慢病毒的构建

(五)慢病毒的筛选

(六)小鼠小肠类器官培养

(七)慢病毒感染小肠类器官

(八)免疫荧光检测

(九)人小肠类器官培养及处理

(十)免疫共沉淀(Co-IP)实验

(十一)免疫印迹检测

(十二)统计分析

三、实验结果

(一)小肠类器官慢病毒敲低体系的构建(MSI2、SOX9和YAP1)

(二)LPS、MPLA激活小肠类器官和隐窝细胞中c-Myc-MSI2-SOX9-YAP1信号通路

(三)LPS、MPLA促进c-Myc、MSI2、SOX9、YAP1形成新复合物

四、分析与讨论

全文总结

参考文献

附录

综述

攻读学位期间发表论文和参加科研工作情况

致谢